【摘要】： 目的:對金龜子綠僵菌的代謝產(chǎn)物進(jìn)行初步的研究,驗證其產(chǎn)物中苦馬豆素(swainsonine,SW)的存在,為SW的來源提供新的研究思路;同時分析代謝產(chǎn)物中的其它有效成分,為進(jìn)一步開發(fā)研究金龜子綠僵菌的藥用價值奠定基礎(chǔ)。 方法:①采用馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養(yǎng)基對金龜子綠僵菌進(jìn)行定期的傳代培養(yǎng);②用查氏蛋白胨培養(yǎng)基對金龜子綠僵菌進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng),收集發(fā)酵液;③運(yùn)用氣相色譜法對發(fā)酵液中的SW進(jìn)行定性定量分析;④首先采用離心、過濾、濃縮等方法對發(fā)酵液進(jìn)行預(yù)處理,再運(yùn)用薄層層析檢測技術(shù)對發(fā)酵液中的活性成分進(jìn)行跟蹤,同時采用反復(fù)萃取、層析分離、真空升華等化學(xué)提取方法對發(fā)酵液分離提取;⑤運(yùn)用氣相色譜法對升華提取物進(jìn)行定性分析;⑥采用GC-MS聯(lián)用分析技術(shù),對提取物進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析鑒定。 結(jié)果:①傳統(tǒng)的馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養(yǎng)基即可用于金龜子綠僵菌的傳代,且該菌生長狀態(tài)良好;②用于發(fā)酵培養(yǎng)的查氏蛋白胨培養(yǎng)基中選用葡萄糖和蛋白胨的質(zhì)量比為2:1,培養(yǎng)溫度為26℃,pH值為6.5,符合該菌正常生長的范圍;③通過氣相色譜法測定,發(fā)酵液中所含SW的含量為10.2131mg·L-1,與外文報道的濃度為9.0400 mg·L-1基本一致;④真空升華得到SW的粗品,再經(jīng)氣相色譜法對其粗品進(jìn)行定性定量分析,結(jié)果表明此粗品中含有SW,且含量為44.94%。經(jīng)折算,平均每升發(fā)酵液提取SW 0.0038g。而發(fā)酵液中所測得SW的含量為10.2131mg·L-1,因此提取率為37.21%;⑤采用GC-MS聯(lián)用法,鑒定出5種單體化合物,分別為棕櫚酸甲酯、1-甲基-7異丙基菲、1,4-雙甲基-(4-甲苯基)-1,3二烯烴、A′-Neogammacer-22(29)-en-3-ol,acetate、鄰苯二甲酸二(2-乙基)己酯;7種未知化合物,其中包括兩種同分異構(gòu)體。 小結(jié):經(jīng)初步的研究結(jié)果表明,金龜子綠僵菌的代謝產(chǎn)物中確實含有SW,初步分離后,得到了SW粗品,同時還得到并鑒定出該代謝產(chǎn)物中含有其它的5種已知結(jié)構(gòu)的化合物,和7種未知結(jié)構(gòu)的化合物。據(jù)此可說明本試驗所探索的分離提取方法是具有可行性的,但SW的損失很大,提取率較低,因此本方法需要完善和成熟;五種已知的單體化合物具體的生物活性作用還需要進(jìn)一步研究證實;對于未知結(jié)構(gòu)的化合物也需要進(jìn)一步的結(jié)構(gòu)分析;同時還應(yīng)探索別的分離提取方法去尋求代謝產(chǎn)物中其它的有效活性物質(zhì);研究SW在金龜子綠僵菌代謝過程中的生物合成機(jī)制,希望以此能來提高SW的產(chǎn)量。
【圖文】：

.2 SW 的理化性質(zhì)SW 為白色針狀結(jié)晶，熔點 144～145℃，分子式為 C8H15NO3，分子量 17、乙醇、乙醚、丙酮、氨性氯仿等有機(jī)溶劑，酸解離常數(shù) pKa 為 7.4。SW上屬于多羥基吲哚里西啶生物堿，在吲哚里西啶環(huán)的 1，2，8 位上各有一個 學(xué) 系 統(tǒng) 命 名 為 1 ， 2 ， 8 － 三 羥 基 八 氫 吲 哚 里 西 啶 （ 1 ，ihydroxyocahydroindolizidine)。從有機(jī)化學(xué)分類上看，三個羥基直接連在環(huán)的該屬于醇，故又被命名為吲哚里西啶三醇（indolizidine triol)。從植物中分立體構(gòu)型被命名為 8αβ－吲哚里西啶－1α，2α，8β－三醇（8αβ－indolizidinriol)或 1α，2α，8β，8αβ－吲哚里西啶三醇；從豆類絲核菌中分離出的 SW，被命名為（1S，2R，8R，8αR)-1,2,8-三羥基吲哚里西啶或 8αR－吲哚里西啶R,－三醇或 1S，，2R，8R，8αR－吲哚里西啶三醇[33]。W 分子結(jié)構(gòu)及其質(zhì)譜裂解圖見圖 1－1，立體結(jié)構(gòu)為半椅式，見圖 1－2[40]。甘露糖陽離子立體結(jié)構(gòu)比較見圖 1－3。

圖 1－3 SW 陽離子（下）與甘露糖基陽離子（上）立體結(jié)構(gòu)比較圖Chart 1-3 The compare chart of tridimensional configuration of cation of SW and mannoseSW 的來源 植物目前知道含有 SW 的植物有：（1）豆科苦馬豆屬植物，如灰苦馬豆（Swacens),是首先分離出 SW 的植物，主要分布于澳大利亞[40]。（2）豆科黃tragalas)和棘豆屬（Oxytropis)(瘋草），這類植物是國內(nèi)外研究較多的植物，各地，尤其是北美和我國。（3）錦葵科黃花稔屬(Sida)，主要分布于熱帶美2]。（4)旋花科番薯屬，Haraguchi M(2003)等從 Ipomea carnea 的葉子、花和出 SW，這類植物主要分布于澳大利亞[43]。植物中的 SW 相當(dāng)穩(wěn)定，據(jù) Molyneux 等（1991）[44]報道，保存 15 年的斑莢 SW。 菌類Schneider 等[35]（1983）最早從豆類絲核菌中分離出 SW；我國楊鳴琦等也從
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：R378

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 郭偉;瘋草內(nèi)生菌FEL3培養(yǎng)條件的優(yōu)化及其產(chǎn)SW的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2010年

本文編號：2561667