【摘要】：研究背景和目的 胚胎干細胞(ESC)具有全能性,能夠分化成一個完整生命個體所需之各式各樣的不同的細胞。ES細胞定向誘導分化是目前國際上研究的熱點,其中ES細胞向生殖細胞的分化是一個非常新的領域。近年來,在移植研究中用原始生殖細胞(PGC)和生殖干細胞(GSC)來改善生育已經(jīng)取得了不同程度的成功,這使研究者們把研究深度進一步加深,用ES細胞作為生殖細胞分化的起始點。到目前為止,共有五個實驗室分化成功。這五個實驗室都是先將胚胎干細胞分化成類胚體(EB),EBs包含早期胚胎典型的組織系統(tǒng),再加一些誘導劑或條件培養(yǎng)基或者只是讓細胞自發(fā)分化,一段時間之后可以檢測到生殖細胞標志分子的表達。本研究是將小鼠睪丸支持細胞與ES細胞共培養(yǎng),支持細胞與ES細胞形成細胞間接觸,同時支持細胞還可以分泌一些細胞因子如骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP—4),在這兩種因素的作用下,誘導ES細胞向生殖細胞分化,目的在于用模擬體內(nèi)的微環(huán)境來誘導ES細胞分化成生殖細胞。我們將小鼠睪丸支持細胞與ES細胞共培養(yǎng),在一定的時間點用RT-PCR,原位雜交,免疫組化和Western-Blotting檢測生殖細胞標志分子的表達;其中鼠vasa同源體(Mvh)的表達有力證實了小鼠ES細胞分化成生殖細胞。通過該研究,我們用模擬體內(nèi)的微環(huán)境誘導ES細胞分化成生殖細胞,建立一種相對穩(wěn)定的體外分化系統(tǒng),有助于分析生殖細胞分化過程中的基因演變和外遺傳的程序重調(diào),有助于核轉移技術的發(fā)展和不育治療。 第一部分 小鼠睪丸支持細胞的分離培養(yǎng)與鑒定 方法:取18～20天雄性ICR小鼠的睪丸,酶消化法原代培養(yǎng)。用RT-PCR的方法克隆帶有鋅指結構域的支持細胞基因(SERZ),與pcDNA3.0連接后構建重組質
【圖文】：

圖IB相差顯微鏡下的支持細胞(ZxOO)FigIBSCunderPhase一eonrtastmieorseoPe(x200)電鏡觀察支持細胞在電鏡下有特征性結構，對細胞進行電鏡觀察。電鏡下，支持呈三角形或不規(guī)則形，染色淺，核仁明顯，胞質內(nèi)細胞器比較豐富，、溶酶體和線粒體較多，相鄰細胞之間形成緊密連接(圖ZA一D)。

質逐漸增大，折光性減弱。3一4d后細胞鋪成膜狀單層，，細胞間隙變小，呈圓形或橢圓形。4一6d細胞完全鋪開。細胞多為多邊形，有較大核仁，其形態(tài)和胞質面積不再改變(圖IA一B)。
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2006
【分類號】：R329

【引證文獻】

相關碩士學位論文 前1條

1 周雪原;大鼠骨髓間充質干細胞對不育大鼠生殖系統(tǒng)修復作用的研究[D];內(nèi)蒙古大學;2012年

本文編號：2560461