【摘要】：目的:利用含有人c-met cDNA全長的pRS2質粒,構建c-met胞外區(qū)重組體,并用重組體轉染真核細胞表達含c-met胞外區(qū)的融合蛋白,為將來篩選c-met特異性抑制分子,進行抗腫瘤侵襲和轉移研究提供基礎。方法:用PCR擴增c-met的胞外區(qū)片段,限制性內切酶酶切,構建到pSecTaq2/Hygro B中,酶切、測序等鑒定后,重組體(pSecTaq2/Hygro B—C—met~m)轉染CHO細胞,用RT-PCR、Western Blot方法檢測重組蛋白的表達。通過競爭性結合抑制實驗觀察重組蛋白的對HGF介導的細胞離散、內皮細胞增殖有無影響,判斷表達蛋白的生物活性。結果:成功構建出pSecTaq2/Hygro-c-met~m重組質粒,Western Blot方法檢測出融合蛋白的表達。離散實驗發(fā)現(xiàn)重組蛋白能夠明顯抑制HGF對HepG2細胞離散及內皮細胞增殖作用。結論:成功構建肝細胞生長因子受體(c-met)胞外區(qū)蛋白真核表達載體,在CHO細胞中獲得分泌性表達,這種分泌蛋白可以競爭結合HGF,應該有c-met胞外區(qū)活性。
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2005
【分類號】：R346

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本文編號：2560242