【摘要】：目的:利用含有人c-met cDNA全長(zhǎng)的pRS2質(zhì)粒,構(gòu)建c-met胞外區(qū)重組體,并用重組體轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞表達(dá)含c-met胞外區(qū)的融合蛋白,為將來(lái)篩選c-met特異性抑制分子,進(jìn)行抗腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移研究提供基礎(chǔ)。方法:用PCR擴(kuò)增c-met的胞外區(qū)片段,限制性內(nèi)切酶酶切,構(gòu)建到pSecTaq2/Hygro B中,酶切、測(cè)序等鑒定后,重組體(pSecTaq2/Hygro B—C—met~m)轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞,用RT-PCR、Western Blot方法檢測(cè)重組蛋白的表達(dá)。通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合抑制實(shí)驗(yàn)觀察重組蛋白的對(duì)HGF介導(dǎo)的細(xì)胞離散、內(nèi)皮細(xì)胞增殖有無(wú)影響,判斷表達(dá)蛋白的生物活性。結(jié)果:成功構(gòu)建出pSecTaq2/Hygro-c-met~m重組質(zhì)粒,Western Blot方法檢測(cè)出融合蛋白的表達(dá)。離散實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)重組蛋白能夠明顯抑制HGF對(duì)HepG2細(xì)胞離散及內(nèi)皮細(xì)胞增殖作用。結(jié)論:成功構(gòu)建肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體(c-met)胞外區(qū)蛋白真核表達(dá)載體,在CHO細(xì)胞中獲得分泌性表達(dá),這種分泌蛋白可以競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合HGF,應(yīng)該有c-met胞外區(qū)活性。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類(lèi)號(hào)】：R346

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本文編號(hào)：2560242