【摘要】：B7分子主要表達在樹突狀細胞(DC)、巨噬細胞及B細胞等抗原遞呈細胞(APC)。APC表達的B7分子與T細胞表達的CD28分子結(jié)合，轉(zhuǎn)導(dǎo)T細胞活化所需的共刺激信號，促進細胞因子的分泌。對免疫應(yīng)答起激發(fā)作用；而B7分子與其另一天然受體即表達在活化T細胞上的CTLA-4結(jié)合，則阻止T細胞的活化與增殖，對免疫應(yīng)答起抑制作用。B7-CD28／CTLA-4共同調(diào)控免疫應(yīng)答的平衡與穩(wěn)定。 共信號分子的特異性抗體，可模擬或阻斷共信號。該類抗體可為深入研究共信號的生物學(xué)效應(yīng)及分子機制提供重要的手段。同時通過特異抗體增強或減弱共信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，對免疫功能低下或異常升高的疾病具有治療作用。因此，B7分子單克隆抗體的研制在基礎(chǔ)研究及臨床應(yīng)用中具有重要價值。 1．鼠抗人B7-1單抗的研制及特性鑒定 以高表達膜型B7-1分子的人惡性B淋巴瘤細胞株Daudi為免疫原，，采用B淋巴細胞融合技術(shù)，將免疫小鼠脾臟細胞與小鼠骨髓瘤細胞SP2／0進行融合。以人B7-1基因轉(zhuǎn)染小鼠成纖維細胞株(L929-B7-1)為陽性篩選細胞，經(jīng)反復(fù)篩選及克隆化培養(yǎng)，獲得一株穩(wěn)定分泌特異性鼠抗人B7-1單抗的雜交瘤細胞株，命名為10D9。快速定性試紙法分析，10D9重鏈為IgG1，輕鏈為κ鏈。經(jīng)體外連續(xù)傳代培養(yǎng)，液氮凍存，復(fù)蘇后生長良好，抗體分泌性能穩(wěn)定。染色體數(shù)目分析顯示，雜交瘤細胞株的染色體在100條以上。采用本室建立的腹水誘生法制備單抗，腹水形成陽性率約為80％以上，腹水的收獲量平均為5ml／只。經(jīng)ProteinG親和層析柱分離純化，腹水中抗體蛋白的得率為1.5～2.0mg／ml。純化抗體用于間接免疫熒光檢測的用量為0.2～1μg/l×10~6細胞。經(jīng)Western Blotting分析，10D9能與B7-1分子特異性結(jié)合，表明10D9是B7-1的特異性單抗。該單抗能識別人B淋巴瘤細胞株Daudi、Raji以及人肺癌細胞株H1299表達的膜型B7-1分子。同時能用于腫瘤組織B7-1分子的免疫組化分析。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：R392

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 孫中文;免疫突觸與協(xié)同刺激分子[J];上海免疫學(xué)雜志;2003年03期

2 邱玉華,張學(xué)光,郭玲,劉俊恒;可溶性白細胞介素6受體特異性檢測方法的建立[J];中華血液學(xué)雜志;1997年12期

3 邱玉華，張學(xué)光，謝煒，朱學(xué)東;一種顯著提高小鼠生產(chǎn)單抗腹水產(chǎn)量的新方法[J];中國免疫學(xué)雜志;1995年06期

本文編號：2554362