【摘要】：目的克隆、表達(dá)與純化結(jié)核分枝桿菌CFP32蛋白,并對(duì)其進(jìn)行細(xì)胞免疫學(xué)特性評(píng)價(jià)。方法 PCR擴(kuò)增cfp32基因片段,與pET-30a(+)構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒,在大腸桿菌中誘導(dǎo)表達(dá),對(duì)融合蛋白進(jìn)行純化,ELISPOT試驗(yàn)測(cè)定其細(xì)胞免疫應(yīng)答,通過牛結(jié)核外周血IFN-γ釋放試驗(yàn),評(píng)價(jià)其作為刺激原的能力。結(jié)果構(gòu)建了正確基因序列的重組質(zhì)粒,并在BL21(DE3)中高效可溶性表達(dá),融合蛋白大小為32ku,純度達(dá)91.8%。ELISPOT顯示CFP32蛋白刺激機(jī)體分泌IFN-γ和IL-4的細(xì)胞數(shù)相當(dāng),呈現(xiàn)Th1/Th2的平衡。在牛結(jié)核外周血IFN-γ釋放試驗(yàn)中,其陽(yáng)性符合率和陰性符合率分別為40%和73.3%,與牛型PPD刺激結(jié)果的相關(guān)系數(shù)為0.684。結(jié)論成功構(gòu)建CFP32蛋白重組表達(dá)菌,該蛋白引起的免疫應(yīng)答趨向于Th1/Th2的平衡,并且有作為刺激原用于牛結(jié)核病檢測(cè)的潛力。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

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2 周海霞;陳祥;鄭佳玉;牛中偉;潘志明;焦新安;;結(jié)核分枝桿菌RD1區(qū)rv3873基因的原核表達(dá)及其產(chǎn)物的細(xì)胞免疫特性初步分析[J];中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào);2010年07期

3 陳祥;徐正中;時(shí)振華;范峰;蔣鎖俊;孟闖;黃根成;單鋒麗;焦新安;;γ-干擾素試驗(yàn)和皮試變態(tài)反應(yīng)對(duì)檢測(cè)奶牛結(jié)核病的比較[J];中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào);2011年02期

【共引文獻(xiàn)】

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8 潘志明;張曉明;焦新安;Richard Lo-Man;Claude Leclerc;劉秀梵;;重組減毒細(xì)菌運(yùn)送CD8~+T細(xì)胞表位的效應(yīng)分析[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2006年06期

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相關(guān)會(huì)議論文 前2條

1 張輝;文科;黃金林;胡茂志;申峻松;潘志明;焦新安;;嵌合鞭毛蛋白fliC/esat的佐劑效應(yīng)研究[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)生物制品學(xué)分會(huì)中國(guó)微生物學(xué)會(huì)獸醫(yī)微生物學(xué)專業(yè)委員會(huì)2010年學(xué)術(shù)年會(huì)（第三屆中國(guó)獸藥大會(huì)學(xué)術(shù)論壇）論文集[C];2010年

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相關(guān)博士學(xué)位論文 前4條

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

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10 張成全;陳祥;牛中偉;楊衛(wèi)沖;徐正中;孟闖;潘志明;黃金林;焦新安;;重組牛γ-干擾素單克隆抗體的研制[J];中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào);2009年04期

【相似文獻(xiàn)】

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4 張s

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