【摘要】：目的克隆、表達與純化結(jié)核分枝桿菌CFP32蛋白,并對其進行細胞免疫學(xué)特性評價。方法 PCR擴增cfp32基因片段,與pET-30a(+)構(gòu)建重組表達質(zhì)粒,在大腸桿菌中誘導(dǎo)表達,對融合蛋白進行純化,ELISPOT試驗測定其細胞免疫應(yīng)答,通過牛結(jié)核外周血IFN-γ釋放試驗,評價其作為刺激原的能力。結(jié)果構(gòu)建了正確基因序列的重組質(zhì)粒,并在BL21(DE3)中高效可溶性表達,融合蛋白大小為32ku,純度達91.8%。ELISPOT顯示CFP32蛋白刺激機體分泌IFN-γ和IL-4的細胞數(shù)相當,呈現(xiàn)Th1/Th2的平衡。在牛結(jié)核外周血IFN-γ釋放試驗中,其陽性符合率和陰性符合率分別為40%和73.3%,與牛型PPD刺激結(jié)果的相關(guān)系數(shù)為0.684。結(jié)論成功構(gòu)建CFP32蛋白重組表達菌,該蛋白引起的免疫應(yīng)答趨向于Th1/Th2的平衡,并且有作為刺激原用于牛結(jié)核病檢測的潛力。

【參考文獻】

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【相似文獻】

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4 張s

本文編號：2554569