【摘要】： 目的：研究傷寒沙門菌耐藥質(zhì)粒pR_(ST98)在小鼠體內(nèi)向大腸埃希菌的接合轉(zhuǎn)移，比較質(zhì)粒在體內(nèi)外接合轉(zhuǎn)移的異同及影響因素。 方法：由于傷寒沙門菌是一種嚴(yán)格只對人類致病的病原菌，沒有合適的動(dòng)物模型，因此將傷寒沙門菌的耐藥質(zhì)粒pR_(ST98)導(dǎo)入遺傳背景明確的鼠傷寒沙門菌低毒株RIA中，形成接合子pR_(ST98)／RIA，口飼BALB／c小鼠進(jìn)行體內(nèi)耐藥質(zhì)粒接合轉(zhuǎn)移的研究。 1．將傷寒沙門菌耐藥質(zhì)粒pR_(ST98)導(dǎo)入大腸埃希菌E. coliK_(12)W_(1485)(F~-)Rif~r Lac~+，獲得接合子pR_(ST98)／E. coliK_(12)W_(1485)，再以接合子pR_(ST98)／E. coliK_(12)W_(1485)為供體，將pR_(ST98)導(dǎo)入鼠傷寒沙門菌低毒株RIA，獲得接合子pR_(ST98)／RIA。用藥敏試驗(yàn)和質(zhì)粒檢測接合子的形成。 2．用SS培養(yǎng)基分離培養(yǎng)未經(jīng)人工感染小鼠體內(nèi)的大腸埃希菌，生化反應(yīng)鑒定獲得的菌株，用藥敏試驗(yàn)和質(zhì)粒譜調(diào)查小鼠腸道細(xì)菌耐藥和質(zhì)粒攜帶狀況。比較小鼠腸道分離菌株耐藥譜和pR_(ST98)編碼的耐藥性差異，以此制備SS抗生素選擇性培養(yǎng)基。 3．20只5周齡BALB／c小鼠，雌雄各半，體重18-20g，每組5只隨機(jī)分為4組，以低于pR_(ST98)／RIA半數(shù)致死量(LD_(50))的四種菌量(10~8、10~7、10~6、10~5 CFU／ml)分別口飼4組小鼠。從第2天起至30天每天用SS抗生素選擇性培養(yǎng)基分離小鼠腸道大腸埃希菌。用生化反應(yīng)鑒定后藥敏試驗(yàn)確定耐藥譜，并進(jìn)一步用質(zhì)粒檢測驗(yàn)證pR_(ST98)在小鼠腸道內(nèi)發(fā)生的接合轉(zhuǎn)移。 結(jié)果：1．在體外傷寒沙門菌很容易將耐藥質(zhì)粒pR_(ST98)轉(zhuǎn)移給大腸埃希菌E. coliK_(12)W_(1485)(F~-)Rif~r Lac~+，接合子pR_(ST98)／E. coliK_(12)W_(1485)又可將pR_(ST98)轉(zhuǎn)移給鼠傷寒沙門菌RIA，，但在不同種屬中pR_(ST98)接合難易程度不同，同一質(zhì)粒在不同宿主菌中耐藥標(biāo)志的表達(dá)亦有差異。接合子pR_(ST98)／E. coliK_(12)W_(1485)中Sm和Gm耐藥標(biāo)志未表達(dá)，接合子pR_(ST98)／RIA中除Sm和Gm外，Cos的耐藥標(biāo)志亦未表達(dá)。 2．從未經(jīng)人工感染小鼠腸道分離了100株大腸埃希菌，所有菌株均有不同程度的耐藥，其中對Ap的耐藥率高達(dá)97％，Sm的耐藥率為42％，但所有菌株對Akn和Cp均敏感。未發(fā)現(xiàn)分離的小鼠腸道菌與pR_(ST98)有相同的耐藥譜，據(jù)此分別選擇Cm和Cp兩種抗生素制備SS抗生素選擇性培養(yǎng)基。質(zhì)粒檢測未發(fā)現(xiàn)小鼠腸道菌有分子量與pR_(ST98)相近的耐藥質(zhì)粒存在。 3．口飼pR_(ST98)／RIA后，第2天SS抗生素選擇性培養(yǎng)基即可篩選到耐受pR_(ST98)編碼抗藥性的紅色菌落，陽性率為40％(8／20)，第3天為65％(13／20)，第4天為80％(16／20)。第8、11和16天，菌量為10~8 CFU／ml組小鼠各死亡1只，第13天菌量為10~7 CFU／ml組小鼠死亡1只，至第30天共死亡4只。第30天抗生素選擇性培養(yǎng)基分離菌株的陽性率為81％(13／16)�？陲昿R_(ST98)／RIA菌量與各組小鼠間腸道菌陽性分離率未見有直接關(guān)系。經(jīng)生化反應(yīng)鑒定，分離的菌株均為大腸埃希菌。藥敏試驗(yàn)顯示陽性菌株的耐藥譜發(fā)生改變，新出現(xiàn)的部分耐藥標(biāo)志與pR_(ST98)的耐藥譜相符，但有些抗生素的耐藥標(biāo)記未能全部表達(dá)。質(zhì)粒檢測顯示體內(nèi)形成的接合子均含耐藥質(zhì)粒pR_(ST98)。 結(jié)論：1．在體外耐藥質(zhì)粒pR_(ST98)可以從傷寒沙門菌S. typhi轉(zhuǎn)移給大腸埃希菌E. coliK_(12)W_(1485)，接合子pR_(ST98)／E. coliK_(12)W_(1485)又可將質(zhì)粒轉(zhuǎn)移給鼠傷寒沙門菌S. typhimurium RIA。2．從未經(jīng)人工感染小鼠體內(nèi)分離的大腸埃希菌藥敏試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，所有菌株對抗生素均有不同程度的耐藥。3．在小鼠體內(nèi)pR_(ST98)／RIA很容易發(fā)生接合轉(zhuǎn)移，經(jīng)生化反應(yīng)證實(shí)獲得的接合子均為大腸埃希菌。4．傷寒沙門菌耐藥質(zhì)粒pR_(ST98)在動(dòng)物體內(nèi)外的接合難易程度不同，同一質(zhì)粒在體內(nèi)外不同宿主菌中耐藥標(biāo)志表達(dá)亦有差異，顯示耐藥質(zhì)粒表達(dá)的多樣性和復(fù)雜性。
【圖文】：

圖1.傷寒沙門菌耐藥質(zhì)粒PRsTg。瓊脂糖凝膠電泳A和NE.eoliV517，標(biāo)準(zhǔn)分子量(35.8，4.8，3.7，3.4，2.6，2.0，1.8，1.4)MdB和Ms.fiexneri2457。，標(biāo)準(zhǔn)分子量(140，105，2.6，2.0)MdC和L對抗生素敏感的傷寒沙門菌D一K多重耐藥傷寒沙門菌

Rs丁98體外接合轉(zhuǎn)移前后供受體菌和接合子的耐藥譜抗生素CmCosSmGmKmAknCPNmAPCb485RRRRRif+Cm‘，‘R口口口RRRRRCm+AP株對某種抗生素耐藥(Resistanee)Tg:從供體向受體轉(zhuǎn)移后接合子中未表達(dá)的耐藥標(biāo)志合轉(zhuǎn)移時(shí)培養(yǎng)基中加入的選擇性抗生素
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R378

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2553672