【摘要】： 日本血吸蟲病是一種分布很廣的、嚴重危害人畜健康的人畜共患寄生蟲病。日本血吸蟲疫苗是血吸蟲病防治研究的重要領域，經(jīng)過幾十年的研究已取得了一定的成績，但是現(xiàn)有疫苗候選分子誘導的免疫保護力均較低，有必要探討如何提高現(xiàn)有疫苗候選分子的免疫效果。佐劑是提高核酸疫苗免疫保護力的重要途徑，因此，本研究構(gòu)建SjFer與粒細胞集落刺激因子(GM-CSF)融合表達載體，以探討GM-CSF對核酸疫苗pcDNA3.0/SjFer免疫保護力的影響。 根據(jù)GenBank中的SjFer基因序列設計特異性引物一對，以日本血吸蟲cDNA文庫為模板PCR擴增SjFer基因，常規(guī)方法構(gòu)建pcDNA3.0/SjFer、pcDNA3.0/GM-CSF及pcDNA3.0/SjFer-GM-CSF。以雌性昆明小鼠為實驗動物，85只，隨機分5組，每組17只，分別接種生理鹽水(A組)、pcDNA3.0(B組)、pcDNA3.0/GM-CSF(C組)、pcDNA3.0/SjFer(D組)及pcDNA3.0/SjFer-GM-CSF(E組)。于0，2，4周通過左后肢股四頭肌每只每次注射純化質(zhì)粒50μg(生理鹽水為50μl)。每次免疫前和感染前采血收集血清，ELISA檢測血清內(nèi)特異性IgG水平。末次免疫后2周每組隨機宰殺5只小鼠無菌取脾，MTT法檢測淋巴細胞增殖情況，并取左后肢股四頭肌作免疫組化以檢查重組質(zhì)粒在小鼠肌細胞內(nèi)的表達情況。末次免疫后兩周每只小鼠經(jīng)腹部感染40±1條尾蚴，45天后宰殺沖蟲，計算減蟲率和減卵率。結(jié)果顯示：pcDNA3.0／GM-CSF、pcDNA3.0／SjFer及pcDNA3.0／SjFer-GM-CSF能在小鼠肌細胞內(nèi)的表達，D組和E組可誘導小鼠IgG抗體水平升高，，且E組IgG抗體水平高于D組。攻擊感染前的淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗結(jié)果顯示，D組和E組的脾淋巴細胞的轉(zhuǎn)化率明顯增加，與對照組差異顯著，且E組的OD_(570)值明顯高于D組。pcDNA3.0／SjFer和pcDNA3.0／SjFer-GM-CSF誘導小鼠分別產(chǎn)生36.27％和39.22％的減蟲率、36.10％和49.04％的減卵率�？梢姡珿M-CSF可增強體液和細胞免疫應答并顯著增強pcDNA3.0／SjFer的免疫保護力。
【圖文】：

peDNA3.o/SjFe:的鑒定0DNA分子量對照;MZ，Marker111DNA分子量對照r經(jīng)B溯Hl、腸01雙酶切結(jié)果;2，重組質(zhì)粒pcDN:的PCR產(chǎn)物icationofreeombinantPlasmidPcDNA3.0/sj’FerMarker;MZ，DNAMarker111:l，PeDNA3.O/SjFerdegiste2，reeombinantPlasmidPeDNA3‘0/Sj石’er:3，pCr繃﨏枷期徹崢

重組質(zhì) 粒peDNA3.0/SjFe:經(jīng)BamHI和乃口I雙酶切后，出現(xiàn)2條帶，其中一條大小約為520bp，與預期大小相符(圖 3);PcDNA3.0/GM一CSF經(jīng)眾口I與KPnl雙酶切后，出現(xiàn)2條帶，其中一條大小約為400bp，與預期大小相符(圖4);pcDNA3.0/S，’ Fer一oM一esF是在 PcDNA3.0/SjFe:的基礎上加入GM一CSF構(gòu)建而成，經(jīng)乃口I與助nl雙酶切得到的2條帶中，其中一條帶約為goobP，與預期大小相符(習凡r+GM一csF，圖5)。
【學位授予單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R392;S852.5

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 李小紅;血吸蟲致弱疫苗的研究進展[J];國外醫(yī)學(寄生蟲病分冊);2003年03期

2 韓海勃;曹建平;;日本血吸蟲硫氧還蛋白編碼基因的克隆表達及其免疫原性研究[J];國際醫(yī)學寄生蟲病雜志;2006年01期

3 邱元;黃復深;陳爾曼;郝知友;袁鑫;;GM-CSF與豬瘟病毒E_2基因共表達載體的構(gòu)建及其誘導的免疫應答[J];湖南農(nóng)業(yè)大學學報(自然科學版);2007年02期

4 張冉,易新元,曾憲芳,張順科,Larry Mc Reynolds;日本血吸蟲組織蛋白酶B DNA疫苗的免疫保護效果研究[J];寄生蟲與醫(yī)學昆蟲學報;2004年03期

5 周愛琴,張仁利,石淑華,龍彩虹,高世同,林敏,吳少庭;日本血吸蟲Calpain的DNA疫苗誘導小鼠免疫保護性研究[J];中國熱帶醫(yī)學;2003年01期

6 黃復深,易新元,曾憲芳,唐連飛,張順科,Larry McReynolds;重組日本血吸蟲胞質(zhì)氨基肽酶粘膜免疫誘導小鼠抗攻擊感染保護力的研究[J];中國熱帶醫(yī)學;2003年06期

7 陳欲曉,易新元,曾憲芳,唐連飛,王林纖,蔡春,袁仕善;日本血吸蟲Sj31核酸疫苗聯(lián)合IFN-γ重組質(zhì)粒誘導小鼠保護性免疫的研究[J];中國熱帶醫(yī)學;2004年03期

8 黃復深,易新元,曾憲芳,唐連飛,Larry Mc Reynolds;日本血吸蟲核酸疫苗pcDNA3.1/SjMf1粘膜免疫小鼠的保護力研究[J];中國熱帶醫(yī)學;2004年03期

9 羅永慧,易新元,曾憲芳,蔡春,張順科;重組日本血吸蟲32kDa蛋白和鐵蛋白聯(lián)合免疫保護作用的研究[J];熱帶醫(yī)學雜志;2003年04期

10 杜德偉,周永興,馮志華,姚志強;IL-12的真核表達載體增強小鼠對DNA疫苗的免疫應答[J];細胞與分子免疫學雜志;2000年03期

本文編號：2553348