【摘要】： 日本血吸蟲(chóng)病是一種分布很廣的、嚴(yán)重危害人畜健康的人畜共患寄生蟲(chóng)病。日本血吸蟲(chóng)疫苗是血吸蟲(chóng)病防治研究的重要領(lǐng)域，經(jīng)過(guò)幾十年的研究已取得了一定的成績(jī)，但是現(xiàn)有疫苗候選分子誘導(dǎo)的免疫保護(hù)力均較低，有必要探討如何提高現(xiàn)有疫苗候選分子的免疫效果。佐劑是提高核酸疫苗免疫保護(hù)力的重要途徑，因此，本研究構(gòu)建SjFer與粒細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)融合表達(dá)載體，以探討GM-CSF對(duì)核酸疫苗pcDNA3.0/SjFer免疫保護(hù)力的影響。 根據(jù)GenBank中的SjFer基因序列設(shè)計(jì)特異性引物一對(duì)，以日本血吸蟲(chóng)cDNA文庫(kù)為模板PCR擴(kuò)增SjFer基因，常規(guī)方法構(gòu)建pcDNA3.0/SjFer、pcDNA3.0/GM-CSF及pcDNA3.0/SjFer-GM-CSF。以雌性昆明小鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，85只，隨機(jī)分5組，每組17只，分別接種生理鹽水(A組)、pcDNA3.0(B組)、pcDNA3.0/GM-CSF(C組)、pcDNA3.0/SjFer(D組)及pcDNA3.0/SjFer-GM-CSF(E組)。于0，2，4周通過(guò)左后肢股四頭肌每只每次注射純化質(zhì)粒50μg(生理鹽水為50μl)。每次免疫前和感染前采血收集血清，ELISA檢測(cè)血清內(nèi)特異性IgG水平。末次免疫后2周每組隨機(jī)宰殺5只小鼠無(wú)菌取脾，MTT法檢測(cè)淋巴細(xì)胞增殖情況，并取左后肢股四頭肌作免疫組化以檢查重組質(zhì)粒在小鼠肌細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)情況。末次免疫后兩周每只小鼠經(jīng)腹部感染40±1條尾蚴，45天后宰殺沖蟲(chóng)，計(jì)算減蟲(chóng)率和減卵率。結(jié)果顯示：pcDNA3.0／GM-CSF、pcDNA3.0／SjFer及pcDNA3.0／SjFer-GM-CSF能在小鼠肌細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)，D組和E組可誘導(dǎo)小鼠IgG抗體水平升高，，且E組IgG抗體水平高于D組。攻擊感染前的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)結(jié)果顯示，D組和E組的脾淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率明顯增加，與對(duì)照組差異顯著，且E組的OD_(570)值明顯高于D組。pcDNA3.0／SjFer和pcDNA3.0／SjFer-GM-CSF誘導(dǎo)小鼠分別產(chǎn)生36.27％和39.22％的減蟲(chóng)率、36.10％和49.04％的減卵率�？梢�(jiàn)，GM-CSF可增強(qiáng)體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答并顯著增強(qiáng)pcDNA3.0／SjFer的免疫保護(hù)力。
【圖文】：

peDNA3.o/SjFe:的鑒定0DNA分子量對(duì)照;MZ，Marker111DNA分子量對(duì)照r經(jīng)B溯Hl、腸01雙酶切結(jié)果;2，重組質(zhì)粒pcDN:的PCR產(chǎn)物icationofreeombinantPlasmidPcDNA3.0/sj’FerMarker;MZ，DNAMarker111:l，PeDNA3.O/SjFerdegiste2，reeombinantPlasmidPeDNA3‘0/Sj石’er:3，pCr繃﨏枷期徹崢

重組質(zhì) 粒peDNA3.0/SjFe:經(jīng)BamHI和乃口I雙酶切后，出現(xiàn)2條帶，其中一條大小約為520bp，與預(yù)期大小相符(圖 3);PcDNA3.0/GM一CSF經(jīng)眾口I與KPnl雙酶切后，出現(xiàn)2條帶，其中一條大小約為400bp，與預(yù)期大小相符(圖4);pcDNA3.0/S，’ Fer一oM一esF是在 PcDNA3.0/SjFe:的基礎(chǔ)上加入GM一CSF構(gòu)建而成，經(jīng)乃口I與助nl雙酶切得到的2條帶中，其中一條帶約為goobP，與預(yù)期大小相符(習(xí)凡r+GM一csF，圖5)。
【學(xué)位授予單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類(lèi)號(hào)】：R392;S852.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2553348