【摘要】： 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)是骨髓中除造血干細(xì)胞以外的另一類干細(xì)胞,具有多向分化潛能。在眼科領(lǐng)域,在體內(nèi)外可將BMSCs誘導(dǎo)成視網(wǎng)膜光感受器樣細(xì)胞。發(fā)育神經(jīng)學(xué)的研究證實(shí)視網(wǎng)膜的發(fā)育具有時(shí)相性。BMSCs向視網(wǎng)膜光感受器樣細(xì)胞的誘導(dǎo)成功使BMSCs向視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的誘導(dǎo)成為可能,為本文提供了理論依據(jù)。 本研究采用Percoll分離液體外分離法,體外培養(yǎng)出能穩(wěn)定傳代的大鼠BMSCs。并在Transwell雙層培養(yǎng)體系下,利用乳鼠視網(wǎng)膜細(xì)胞誘導(dǎo)BMSCs,誘導(dǎo)后細(xì)胞經(jīng)免疫組化及RT-PCR、免疫熒光鑒定,NF、nestin、β-III Tubulin、Thy1.1表達(dá)陽(yáng)性,證實(shí)了誘導(dǎo)后細(xì)胞為視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)樣細(xì)胞。 本文采用SELDI蛋白芯片技術(shù)檢測(cè)了BMSCs、誘導(dǎo)后的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)樣細(xì)胞及原代培養(yǎng)的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(RGCs)的蛋白質(zhì)譜。結(jié)果顯示:與BMSCs質(zhì)譜相比,誘導(dǎo)后的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)樣細(xì)胞質(zhì)譜有16個(gè)標(biāo)志分子增高,其中有11個(gè)標(biāo)志分子在RGCs質(zhì)譜中也增高。這些標(biāo)志分子與視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞密切相關(guān),它們顯示出了同原代RGCs相同的蛋白質(zhì)分子,但距成熟的RGCs還有少部分差異。 我們利用膜片鉗技術(shù),在大鼠BMSCs上記錄到三種離子電流:對(duì)TTX敏感的鈉電流、L-型電壓依賴型鈣電流以及延遲整流鉀電流。在BMSCs向視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)樣細(xì)胞分化的過程中,鈉、鉀、鈣三種離子電流幅值均有所增加,接近于原代培養(yǎng)的RGCs,但均未達(dá)到其電流幅值,這有可能是BMSCs由前體細(xì)胞向RGCs這一終點(diǎn)轉(zhuǎn)化過程中細(xì)胞由未成熟逐漸邁向成熟的一個(gè)途徑。 本文實(shí)現(xiàn)了在體外將BMSCs誘導(dǎo)為視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)樣細(xì)胞,并從蛋白組學(xué)和細(xì)胞電生理功能上證明了誘導(dǎo)后細(xì)胞的神經(jīng)元特性,為青光眼視神經(jīng)損傷等疾病的治療提供了前期工作基礎(chǔ)。
【圖文】：

原代BMSCs24h開始貼壁

原代BMSCs傳至第三代
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R329

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2550645