【摘要】：目的：探討雙氫青蒿素(dihydroartemisinin，DHA)對體外培養(yǎng)的藍(lán)氏賈第鞭毛蟲滋養(yǎng)體的損傷作用。 方法：用改良TYI-S-33培養(yǎng)基培養(yǎng)藍(lán)氏賈第鞭毛蟲滋養(yǎng)體，繪制蟲體生長曲線；設(shè)立實驗組(DHA組)、陽性對照組(MTZ組)和正常對照組(C組)。實驗組和陽性對照組分別用含不同濃度的雙氫青蒿素和甲硝唑的培養(yǎng)基培養(yǎng)；對照組的培養(yǎng)基不含藥。用光學(xué)顯微鏡觀察藥物作用后蟲體的活力、形態(tài)變化；測算蟲體的死亡率和測定藥物的半數(shù)致死濃度(medial lethal concentration，LC_(50))；對上述相關(guān)數(shù)據(jù)用SPSS統(tǒng)計軟件分析比較；用透射電鏡觀察藥物作用后不同時間滋養(yǎng)體的超微結(jié)構(gòu)變化；以熒光染料羅丹明-鬼筆環(huán)肽(rhodanmine phalloidin，RDP)標(biāo)記微絲，紫杉醇(Paclitaxel，Oregen Green 488，P22310)標(biāo)記微管，用流式細(xì)胞術(shù)(flowcytometry，F(xiàn)CM)和激光共聚焦顯微鏡(confocal microscopy，CFM)檢測、觀察滋養(yǎng)體微絲和微管的變化；用碘化丙啶(propidium iodide，PI)標(biāo)記蟲體的DNA，并以流式細(xì)胞儀檢測各組蟲體細(xì)胞周期的變化；收集實驗組和對照組蟲體，分別擴(kuò)增賈第蟲磷酸丙糖異構(gòu)酶(tim)基因、拓?fù)洚悩?gòu)酶(TopoⅡ)基因、核纖層(lamin)基因和β-賈第素(β-giardin)基因片段，分析比較藥物作用前后各基因片段序列的變化；提取蟲體總蛋白，用Bradford法進(jìn)行蛋白質(zhì)定量測定，樣本經(jīng)蛋白質(zhì)2D—電泳和硝酸銀染色后掃描檢測蛋白點(diǎn)的數(shù)量和種類，初步分析藥物作用后蛋白質(zhì)的變化。 結(jié)果：光學(xué)顯微鏡觀察結(jié)果顯示，經(jīng)雙氫青蒿素作用后，貼壁生長的蟲體從培養(yǎng)管壁脫落、變形、腫脹、表面出現(xiàn)空泡；失去正常的“瓢形”運(yùn)動，，鞭毛擺動遲緩或停止。蟲體死亡率隨著藥物作用時間延長和濃度的增加而增高(P＜0.001)。在同一作用時間內(nèi)，隨著藥物濃度的增高，蟲體死亡率也隨之升高，即當(dāng)雙氫青蒿素作用24h，藥物濃度為100μg／ml時，死亡率為48.68％，而當(dāng)藥物濃度增高至
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：R285;R382

【引證文獻(xiàn)】

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1 李薇;青蒿琥酯對白紋伊蚊四齡幼蟲的毒性研究[D];暨南大學(xué);2008年

本文編號：2539738