【摘要】： 嗎啡有多種藥理學(xué)作用,包括鎮(zhèn)痛、調(diào)節(jié)免疫功能和神經(jīng)內(nèi)分泌等。我們以往的工作表明,慢性嗎啡處理將導(dǎo)致中樞催產(chǎn)素(oxytocin,OT)的合成和分泌功能障礙,國外的研究也顯示嗎啡依賴大鼠的孕期和產(chǎn)程均延長,提示嗎啡可抑制OT的分泌和合成,但其分子機(jī)制不清楚。 MOR和催產(chǎn)素受體(OTR)同屬于G蛋白耦聯(lián)受體(GPCRs)的A家族,二者都可以形成同源二聚體和異源二聚體。本工作是從受體的水平探索嗎啡抑制催產(chǎn)素合成與釋放效應(yīng)的分子機(jī)制,并運用生物化學(xué)和生物物理的方法觀察MOR和OTR間是否存在著直接的相互作用,以探討嗎啡作用的新途徑,為阿片類藥物的臨床應(yīng)用提供分子生物學(xué)實驗資料。 本工作首先應(yīng)用體外重組技術(shù)在PIRES載體上構(gòu)建可以在哺乳動物細(xì)胞內(nèi)同時表達(dá)的myc-OTR和flag-MOR目的基因。將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染CHO/COS7細(xì)胞,經(jīng)雙標(biāo)免疫熒光染色和confocal熒光顯微鏡觀察MOR蛋白和OTR蛋白在轉(zhuǎn)染細(xì)胞中的表達(dá)和共定位情況。運用免疫共沉淀(IP)方法證實MOR和OTR異源二聚體存在于體外培養(yǎng)細(xì)胞和大鼠腦組織中。并進(jìn)一步在熒光載體上構(gòu)建與青色熒光蛋白(CFP)融合表達(dá)的MOR和與黃色熒光蛋白(YFP)融合表達(dá)的OTR蛋白。運用生物物理學(xué)方法觀察MOR和OTR分子在活細(xì)胞內(nèi)相互作用,進(jìn)一步證實在活細(xì)胞內(nèi)MOR和OTR異源二聚體的形成。 結(jié)果表明,在大鼠腦組織和不同細(xì)胞株中均存在MOR-OTR異源二聚體,FRET顯示在活細(xì)胞內(nèi)可以觀察到MOR-OTR異源二聚體的形成。
【圖文】：

一1Pl耽S一MOR克隆的構(gòu)建圖

一2Pl邢SMOR一OTR克隆的構(gòu)建圖
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：Q4

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本文編號：2533156