發(fā)布時間：2019-09-06 19:32

【摘要】：CD40是分子量48～50KD的Ⅰ型跨膜糖蛋白,屬腫瘤壞死因子受體(TNFR)超家族成員。CD40廣泛表達于許多類型細胞表面,包括不同發(fā)育和分化階段的B淋巴細胞、單核細胞、樹突狀細胞、造血前體細胞和內(nèi)皮細胞以及一系列腫瘤細胞等。CD40是免疫應(yīng)答中關(guān)鍵性的共信號分子,其與配體(CD40L)的相互作用提供T、B細胞活化所必需的第二信號。CD40分子可介導(dǎo)B細胞的增殖、分化、抗體的分泌和類型轉(zhuǎn)換;樹突狀細胞的激發(fā)、分化和成熟;T淋巴細胞的活化及細胞免疫功能的調(diào)節(jié);內(nèi)皮細胞粘附分子的改變,炎癥因子的釋放,白細胞在炎癥部位的聚集等。 近年研究表明,多種疾病的發(fā)生發(fā)展均與CD40分子相關(guān),如自身免疫性疾病、傳染性疾病、移植排斥、腫瘤及動脈粥樣硬化等。運用阻斷型CD40L抗體在動物模型上可以顯著延長移植器官的生存,但仍然存在副作用和安全性的問題,而直接阻斷CD40分子的治療策略有望能改善其缺點。最近發(fā)現(xiàn)CD40分子除了膜型的形式還存在著可溶性的形式—sCD40,膜型的CD40分子經(jīng)金屬蛋白酶(MP)裂解,釋放至液相成為sCD40,可阻斷膜型CD40和CD40L的相互作用,負(fù)反饋調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答。這種可溶性形式的CD40分子在腎臟和肝臟疾病患者的血清中的濃度遠高于正常人,和這些疾病的發(fā)生、發(fā)展有密切的相關(guān)性。目前關(guān)于CD40阻斷型抗體和sCD40方面的報道甚少,基于我室已經(jīng)成功研制了激發(fā)型CD40單克隆抗體,研制識別位點不同、功能不同的阻斷型CD40單抗以及sCD40 ELISA試劑盒將在腫瘤、移植排斥反應(yīng)和自身免疫性疾病中具有重要的理論研究和臨床應(yīng)用價值。 本研究以高表達CD40分子的XG2細胞株為抗原,應(yīng)用SP2/0作為親本骨髓瘤細胞,采用細胞融合、單克隆抗體篩選、熒光標(biāo)記、免疫印跡和競爭抑制等方法獲得并建立了一株持續(xù)分泌特異性鼠抗人CD40單克隆抗體(mAb)的雜交瘤細胞株,命名為3G3。經(jīng)體外長期傳代培養(yǎng)、液氮凍存半年以上復(fù)蘇良好,分泌抗體的性能穩(wěn)定。 雜交瘤細胞經(jīng)體外擴大培養(yǎng),誘導(dǎo)同種小鼠產(chǎn)生的腹水型單抗,經(jīng)Protein G純
【圖文】：

中胞外段有193個氨基酸(包括21個氨基酸的聯(lián)結(jié)序列)，跨膜區(qū)段包含22個氨基酸殘基，，胞漿區(qū)是62個氨基酸殘基的尾巴。CD40胞外區(qū)包含4個富含半膚氨酸的重復(fù)膚段，這也是TNFR家族成員的典型特征(如圖1)。與TNFR家族其它成員不同的是，CD4O分子胞漿內(nèi)尾巴很特別，既缺少死亡結(jié)構(gòu)域，也沒有激酶活性。但CD4O胞內(nèi)區(qū)段可以通過直接的蛋白一蛋白相互作用或通過募集腫瘤壞死因子受體相關(guān)蛋白(T孫廿s)而激活第二信使信號通路件’4]。CD40最初發(fā)現(xiàn)于B細胞和腫瘤細胞，但隨后的研究表明，CD40廣泛表達子許多類型細胞表面，包括不同發(fā)育和分化階段的B淋巴細胞、單核細胞、樹突狀細胞、造血前體細胞和內(nèi)皮細胞以及一系列腫瘤細胞等11習(xí)。大量的研究顯示:CD40分子可介導(dǎo)B細胞的增殖、分化、抗體的分泌和類型轉(zhuǎn)換;樹突狀細胞的激發(fā)、分化和成熟;T淋巴細胞的活化及細胞免疫功能的調(diào)節(jié);內(nèi)皮細胞粘附分子的改變、炎癥因子的釋放、白細胞在炎癥部位的聚集等，是近年來倍受重視的細胞表面分子[，-6191。

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【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號】：R392

【參考文獻】

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1 莊羽美,黃建安,朱華亭,周璇,馬泓冰,王鳳鳴,Elisabeth Monchatre,Léna Edelman,張學(xué)光;可溶性CD40酶聯(lián)檢測試劑盒的研制及其檢測的臨床意義[J];中國免疫學(xué)雜志;2004年08期

本文編號：2532798