【摘要】：目的 以經(jīng)誘導具有成骨細胞活性的骨髓基質細胞(BMSCs)為種子細胞，同種異體生物衍生骨為載體，觀察細胞的體外培養(yǎng)特性和在生物衍生骨上的復合生長情況，為進一步研究此復合材料修復骨缺損提供實驗依據(jù)。 方法 運用密度梯度離心法結合貼壁培養(yǎng)法，分離純化兔骨髓基質細胞，并進行體外培養(yǎng)擴增；應用成骨添加劑(地塞米松10~(-8)mol／L、β-甘油磷酸鈉10mmol／L、L-抗壞血酸為50μg／ml)定向誘導傳代骨髓基質細胞為成骨細胞；制作同種異體生物衍生骨，，與誘導的成骨細胞進行體外復合培養(yǎng)，并在相差顯微鏡和掃描電鏡下觀察細胞生長情況。 結果 密度梯度離心法結合貼壁培養(yǎng)法分離純化的兔骨髓基質細胞在體外生長良好，能連續(xù)傳代；傳代細胞經(jīng)成骨添加劑誘導后，具有較強的堿性磷酸酶活性，并能表達Ⅰ型膠原蛋白，呈現(xiàn)成骨細胞活性；骨髓基質細胞誘導的成骨細胞能在同種異體生物衍生骨上貼附生長、增殖。 結論 骨髓基質細胞可有效分離、純化，體外培養(yǎng)、擴增效果好，易向成骨方向誘導轉化，可作為骨組織工程的理想種子細胞；同種異體生物衍生骨對骨髓基質細胞誘導的成骨細胞有良好的細胞粘附性和組織相容性，細胞能在其上保持成骨細胞活性，有望成為種子細胞的支架材料運用于骨組織工程研究。
【圖文】：

殖速度明顯加快，前三代傳代細胞均于72小時后貼滿瓶底(圖l一3)。MSCs經(jīng)多次傳代后其分布更均勻有序，形態(tài)趨向單一，多為梭形細胞(圖1一4、5)。連續(xù)傳5代，細胞形態(tài)無明顯變化。換含有成骨誘導劑的條件培養(yǎng)液培養(yǎng)后，于倒置顯微鏡下觀察，細胞生長相對緩慢，約4一5天長滿單層。細胞形態(tài)也逐漸改變，由原先比較均勻一致的成纖維細胞樣變?yōu)椴灰?guī)則形，伸出多個突起并逐漸相互連接。細胞間沒有接觸抑制，呈復層生長，逐漸堆積。圖1一3第二代細胞，/20。圖1一4傳代細胞形態(tài)呈成纖維細胞樣

四川大學碩十學位論文出較強的陽性反應，可見絕大部分細胞胞漿內出現(xiàn)棕黑色或灰黑色硫化鉆顆粒，(圖1一6)。提示誘導培養(yǎng)的細胞具有較強的堿性磷酸酶活性。I型膠原蛋白免疫熒光染色后，在熒光顯微鏡下可見細胞胞漿內出現(xiàn)紅色熒光，呈陽性反應，各個細胞內的熒光強度強弱不一致(圖l一7)。提示誘導培養(yǎng)的細胞可以表達I型膠原蛋白，且主要集中在胞核附近。圖l一6鈣鉆法染色示胞漿中棕黑色硫化鉆顆粒，x40。圖1一7免疫熒光法檢測I型膠原蛋白，x40。3.討論3.1骨組織工程種子細胞的來源問題利用組織工程的方法修復骨缺損成為創(chuàng)傷修復研究的熱點，而理想的種子細胞和支架材料是骨組織工程的兩大關鍵因素。理想的骨組織工程種子細胞應具有以下特點:①取材容易安全;②體外培養(yǎng)增殖能力強;③易于向成骨方向分化;④植入體內能保持成骨活性。骨髓來源豐富，取材方便安全。骨髓基質細胞是骨髓基質系統(tǒng)的非造血性干細胞
【學位授予單位】：四川大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2006
【分類號】：R329

【參考文獻】

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本文編號：2531672