【摘要】： 目的本研究制備攜帶人凝血因子Ⅷ(hFⅧ)基因的重組慢病毒，并肌肉注射到正常大鼠股四頭肌，觀察體內(nèi)的表達(dá)。 方法將含hFⅧ基因的慢病毒載體與包裝質(zhì)粒CMV△R8.74、包膜質(zhì)粒VSV-G轉(zhuǎn)染產(chǎn)毒細(xì)胞293T細(xì)胞，以制備包含EPO cDNA的重組慢病毒。將制備好的重組慢病毒感染HeLa細(xì)胞，檢測(cè)培養(yǎng)上清中hFⅧ的表達(dá)量；直接肌肉注射正常大鼠后，檢測(cè)血漿中hFⅧ抗原濃度和抗體。取注射部位組織中提取DNA進(jìn)行PCR。 結(jié)果48h后取上清測(cè)定hFⅧ抗原高表達(dá)(0.7±0.1)ng／ml。將制備好的重組慢病毒(1×10~8IU／ml)直接肌肉注射到正常大鼠后血清中可檢測(cè)到高水平的hFⅧ抗原，最高達(dá)(33.1±0.1)ng／ml，，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)達(dá)20周。血清hFⅧ抗體第1周最高達(dá)(133.1±5.6)BU／ml，持續(xù)到實(shí)驗(yàn)期間。除在注射部位組織外，其它主要臟器均未觀察到hFⅧ基因的存在。 結(jié)論制備的重組慢病毒在培養(yǎng)細(xì)胞中高水平表達(dá)，肌肉注射后在正常大鼠體內(nèi)能構(gòu)建并長(zhǎng)時(shí)間穩(wěn)定表達(dá)，為血友病A基因治療提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R346

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本文編號(hào)：2531483