【摘要】： 嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila，Ah)和溫和氣單胞菌(Aeromonas sobria，As)分布于世界各地，廣泛存在于淡水、咸淡水和污水中，對養(yǎng)殖及野生魚、蝦、蛙、甲魚等生物有致病性，并可進(jìn)一步通過食物鏈感染人，造成人類的腹瀉和敗血癥等。它們所致魚類等嗜水氣單胞菌病和溫和氣單胞菌病具有流行廣、發(fā)病快、死亡率高等特點(diǎn)，常常造成養(yǎng)殖漁業(yè)的巨大經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重危害漁業(yè)及其它水產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。目前國內(nèi)外有關(guān)嗜水氣單胞菌魚病和溫和氣單胞菌魚病的研究多局限于病原微生物學(xué)方面，，對該病的診斷主要依靠病理觀察及細(xì)菌學(xué)鑒定，兩種方法在準(zhǔn)確性及檢測速度上均有一定限制；防治方面主要利用抗生素或減活、滅活疫苗，安全性和有效性均不理想。鑒于此，本研究設(shè)計制備抗嗜水氣單胞菌單克隆抗體和抗溫和氣單胞菌單克隆抗體，為嗜水氣單胞菌病和溫和氣單胞菌病的檢測及治療提供新的技術(shù)方法，并為進(jìn)一步制備其抗獨(dú)特型單克隆抗體奠定了基礎(chǔ)。具體實驗方法及結(jié)果如下： (1)通過動物免疫、細(xì)胞融合、篩選、克隆化及利用ELISA檢測技術(shù)，制備并鑒定抗嗜水氣單胞菌的單克隆抗體(mAb)和抗溫和氣單胞菌的單克隆抗體(mAb)。獲得5株能穩(wěn)定分泌抗嗜水氣單胞菌mAb的雜交瘤細(xì)胞株，分別命名為1A8、1F11、1G10、3F11、4G10。經(jīng)測定雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清及其誘生的腹水mAb效價分別為1×10~(-2)～1×10~(-3)、1×10~(-5)～1×10~(-6)。5株雜交瘤細(xì)胞系所分泌的單抗亞類是：1F11為IgG1，1A8為IgG2a，1G10、3F11、4G10為IgG2b。其中mAb 3F11經(jīng)交叉反應(yīng)試驗證明，與弧菌屬其它幾種細(xì)菌均不起反應(yīng)，特異性強(qiáng)。獲得6株能穩(wěn)定分泌抗溫和氣單胞菌mAb的雜交瘤細(xì)胞株，分別命名為1A8、2A8、2F11、3C6、3D11、4G2。經(jīng)測定雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清及其誘生的腹水mAb效價分別為1×10~(-2)～1×10~(-3)、1×10~(-5)～1×10~(-6)。6株雜交瘤細(xì)胞系所分泌的單抗亞類是：2A8、2F11為IgG1，1A8、3D11為IgG2a，3C6為IgG2b，4G2為IgG3。其中mAb 3C6經(jīng)交叉反應(yīng)試驗證明，與弧菌屬其它幾種細(xì)菌均不起反應(yīng)，特異性強(qiáng)。它們可分別用于嗜水氣單胞菌和溫和氣單胞菌的檢測及進(jìn)一步研究。 (2)以嗜水氣單胞菌和溫和氣單胞菌分別感染乳鼠為模型。對制備的5株抗嗜水氣單胞菌單抗的治療保護(hù)效果進(jìn)行研究。結(jié)果表明：單抗1G10能提高受10LD_(50)劑量嗜水氣單胞菌感染乳鼠的存活率，其保護(hù)率為62.50％，對乳鼠具有明顯保護(hù)效果。上述結(jié)果提示單抗1G10所針對的可能是嗜水氣單胞菌的中和性抗原表位，具有免疫中和或減弱細(xì)菌毒性的作用，可用作魚類嗜水氣單胞菌感染的中和性抗體治療制劑，也可作為制備嗜水氣單胞菌抗獨(dú)特型抗體的理想候選單克隆抗體。對制備的6株抗溫和氣單胞菌單抗的治療保護(hù)效果進(jìn)行研究。結(jié)果表明：單抗3C6能提高受10LD_(50)劑量溫和氣單胞菌感染乳鼠的存活率，其保護(hù)率為62.50％，對乳鼠具有明顯保護(hù)效果。上述結(jié)果提示單抗3C6所針對的可能是溫和氣單胞菌的中和性抗原表位，具有免疫中和或減弱細(xì)菌毒性的作用，可用作魚類溫和氣單胞菌感染的中和性抗體治療制劑，也可作為制備溫和氣單胞菌抗獨(dú)特型抗體的理想候選單克隆抗體。 綜上所述，本研究利用雜交瘤技術(shù)分別制備出多株抗嗜水氣單胞菌的單克隆抗體和抗溫和氣單胞菌的單克隆抗體，利用乳鼠觀察了治療保護(hù)效果，分別篩選出1株具有保護(hù)作用的細(xì)胞株，為嗜水氣單胞菌病和溫和氣單胞菌病的診斷、治療提供了條件。嗜水氣單胞菌單克隆抗體和溫和氣單胞菌單克隆抗體的研究，國內(nèi)外迄今未見報道。
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R392

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 吳兵;斑點(diǎn)叉尾洶病毒單克隆抗體及血清免疫球蛋白多克隆抗體的制備及初步應(yīng)用[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

本文編號：2529660