【摘要】：鸚鵡熱嗜衣原體(Chlamydophila psittaci，Cps)是一類專性細胞內寄生的人獸共患病病原體，，能引起人和動物多種疾病。Cps對鳥類、家禽和家畜有很強的感染性。人類不是Cps的天然宿主，但寵物飼養(yǎng)者、養(yǎng)禽廠工人等與家禽家畜密切接觸者可通過吸入具有感染性的分泌物而感染，引起肺炎和敗血癥。 Cps主要外膜蛋白(major outer membrane protein，MOMP)是呈感染性的原體(elementary body，EB)表面的主要膜蛋白，在原體的外膜蛋白中占60％左右。氨基酸序列分析表明，MOMP的結構是五個保守區(qū)夾著四個可變區(qū)(variable domain，VD)，血清型特異的抗原決定簇位于VS1或VS2，而種或亞種特異的抗原決定簇位于VS4。 本研究采用PCR法獲得了Cps CE9株MOMP基因片斷，并將其克隆到真核表達載體pcDNA3.1(+)中，構建了重組表達質粒。通過聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction，PCR)以及酶切方法對重組質粒進行了鑒定，結果表明外源基因已經(jīng)成功地插入到真核表達載體pcDNA3.1(+)中。通過對重組質粒進行序列測定，結果表明目的基因已經(jīng)成功地克隆到真核表達載體pcDNA3.1(+)上，且表達載體含有目的基因正確的開放讀碼框。測序結果與Cps其它菌株進行序列比對可知，該序列只有三個堿基突變，重組質粒上MOMP基因的氨基酸序列同標準序列的同源性為99.6％。起始密碼子ATG后的第一個堿基為G，前面的堿基為AAC，目的基因上已經(jīng)含有外源基因轉錄必需的Kozak序列。 利用磷酸鈣法介導重組質粒轉染COS-7細胞，Western Blot方法鑒定外源蛋白在COS-7細胞中的表達情況，結果表明外源基因可以成功的在COS-7細胞中進行表達。用重組質粒對Balb／c小鼠進行免疫，采用間接ELISA法分析特異抗體的產生。經(jīng)過3次免疫，小鼠產生了衣原體MOMP特異的抗體反應，血清抗體滴度隨時間變化呈逐漸上升的趨勢，并持續(xù)較長的時間。本研究為核酸疫苗的深入研究提供了依據(jù)。
【學位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2006
【分類號】：R346

【參考文獻】

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本文編號：2529244