【摘要】： 目的 建立骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells MSCs)培養(yǎng)、擴(kuò)增與鑒定及外周血T淋巴細(xì)胞分離、純化的方法；觀察MSCs及上清對T淋巴細(xì)胞增殖及分泌IL-4、IFN-γ的影響；MSCs對T淋巴細(xì)胞增殖影響的可逆性研究；MSCs對T淋巴細(xì)胞殺傷K562細(xì)胞的影響并探討可能機制。 方法 密度梯度離心法分離出單個核細(xì)胞，，細(xì)胞貼壁法培養(yǎng)并擴(kuò)增MSCs，倒置相差顯微鏡觀察MSCs細(xì)胞形態(tài)，流式細(xì)胞術(shù)檢測MSCs表面抗原、地塞米松誘導(dǎo)MSCs向脂肪細(xì)胞分化；尼龍棉柱法從外周血分選出T淋巴細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行鑒定；MTT法測定MSCs對T淋巴細(xì)胞增殖的影響，ELISA法檢測反應(yīng)體系中IFN-γ、IL-4的分泌；MTT法測定MSCs對T淋巴細(xì)胞增殖影響的可逆性；LDH法檢測T淋巴細(xì)胞對K562細(xì)胞的殺傷，ELISA法檢測反應(yīng)體系IFN-γ、IL-4的分泌，流式細(xì)胞術(shù)檢測CD4~+、CD8~+、CD4~+D25~+T淋巴細(xì)胞的比例。 結(jié)果 MSCs形態(tài)均勻一致，生長曲線顯示增殖能力強，流式細(xì)胞儀檢測顯示CD44、CD13高表達(dá)，經(jīng)地塞米松誘導(dǎo)后MSCs向脂肪細(xì)胞分化，尼龍棉柱法分離的單個核細(xì)胞其CD3陽性細(xì)胞高表達(dá)；MSCs及上清對T淋巴細(xì)胞增殖表現(xiàn)為抑制效應(yīng)；MSCs及上清抑制T淋巴細(xì)胞IFN-γ的分泌，MSCs促進(jìn)T淋巴細(xì)胞IL-4的分泌，上清本身并不能促進(jìn)IL-4分泌；MSCs對T淋巴細(xì)胞增殖抑制具有可逆性；MSCs處理的T淋巴細(xì)胞CD4~+、CD4~+CD25~+亞群升高，MSCs減弱了T淋巴細(xì)胞對K562細(xì)胞的殺傷效應(yīng)，同時IFN-γ分泌減少、IL-4分泌增加。 結(jié)論 本實驗獲得性能可靠的MSCs及T淋巴細(xì)胞；MSCs及上清對T淋巴細(xì)胞增殖表現(xiàn)為抑制效應(yīng)，其作用機制可能包括直接接觸及分泌細(xì)胞因子兩種途徑；MSCs及上清抑制T淋巴細(xì)胞IFN-γ的分泌，MSCs卻促進(jìn)T淋巴細(xì)胞IL-4的分泌，MSCs可能通過改變T淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的種類和數(shù)量影響T淋巴細(xì)胞增殖：MGCs對T淋巴細(xì)胞增殖抑制具有可逆性，MSCs可能不通過凋亡途徑抑制T淋巴細(xì)胞的增殖；MSCs減弱了T淋巴細(xì)胞對K562細(xì)胞殺傷效應(yīng)，與CD4~+、CD4~+CD25~+T淋巴細(xì)胞比例增加及IFN-γ、IL-4分泌水平改變相關(guān)。
【圖文】：

細(xì)胞生長第12天，光鏡下細(xì)胞呈梭形分布，圓形或類圓形外觀，核大，多數(shù)居中，少數(shù)易位，胞漿豐富，呈紫紅色

光鏡下貼壁細(xì)胞呈典型的長梭形外觀，呈旋渦狀、網(wǎng)狀、輻射狀或平行狀生長。(瑞氏染色 1x40)圖3圖4細(xì)胞生長第12天，光鏡下見細(xì)胞迅速增生，形成集落并相互融合成片。(瑞氏染色lx40)細(xì)胞生長第8天，(瑞氏染色lx100)光鏡下貼壁細(xì)胞呈長梭形，核偏大，胞漿豐富。圖5細(xì)胞生長第12天，光鏡下細(xì)胞呈梭形分布，圓形或類圓形外觀，核大，多數(shù)居中，少數(shù)易位，胞漿豐富，呈紫紅色。(瑞氏染色 1x400)二、骨髓MSCs生長曲線的測定原代MSCs接種后前4天曲線平緩，為細(xì)胞生長的潛伏期;第5一8天，?
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R329.2

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本文編號：2517405