發(fā)布時間：2019-07-21 14:10

【摘要】：人巨細(xì)胞病毒(HCMV)是胎兒宮內(nèi)感染和圍產(chǎn)期感染的重要病原,以及因免疫抑制劑、器官和骨髓移植、艾滋病等所致免疫低下患者患嚴(yán)重感染的重要病原體之一,妊娠婦女感染HCMV可通過胎盤傳染給胎兒,導(dǎo)致胎兒發(fā)育遲緩、畸形、低體重兒、黃疸、皮疹等。HCMV也是器官移植失敗和艾滋病病人并發(fā)感染死亡的主要原因,對非免疫缺陷者常導(dǎo)致長期隱性感染或出現(xiàn)非特異癥狀,甚至引起感染細(xì)胞的轉(zhuǎn)化、畸變或癌變,同時也與多種腫瘤的發(fā)生相關(guān),如宮頸癌、前列腺癌、結(jié)腸癌及卡波濟肉瘤。 HCMV主要糖蛋白gB廣泛表達(dá)在病毒顆粒及感染細(xì)胞表面,具有被病毒中和抗體識別的抗原表位,能特異性的誘導(dǎo)機體的免疫反應(yīng),因此被認(rèn)為是HCMV疫苗的重要候選蛋白,制備巨細(xì)胞病毒gB疫苗,對于巨細(xì)胞病毒感染所誘發(fā)的疾病可起到積極的防治作用。 目前許多抗病毒藥物對HCMV感染引起的相關(guān)疾病有較好的療效,但對需要長期維持治療的病人常產(chǎn)生耐藥現(xiàn)象,且均存在不同程度的毒性作用,給臨床治療帶來困難。因此,研制新型抗HCMV藥物,對于HCMV感染引起的相關(guān)疾病的治療是非常必須的。 研究內(nèi)容: 一、HCMV主要包膜糖蛋白gB疫苗的構(gòu)建及免疫原性檢測 1.利用分子生物學(xué)技術(shù)構(gòu)建構(gòu)建人巨細(xì)胞病毒(HCMV)包膜糖蛋白gB真核基因表達(dá)載體pCMV.gB。 2.初步評價其作為核酸疫苗在小鼠體內(nèi)的免疫效果 通過皮下接種免疫小鼠,測量小鼠的體溫、體重等一般情況,利用LDH釋放試驗檢測免疫小鼠的NK細(xì)胞活性,MTT法檢測T細(xì)胞增殖活性、IL-2活性,ELISA方法檢測小鼠的抗HCMV IgM、IgG抗體及IL-2、IL-4含量。 實驗結(jié)果顯示:成功構(gòu)建gB表達(dá)載體pCMV.gB,用其免疫小鼠后,
【圖文】：

pCMv.gB質(zhì)粒構(gòu)建示意圖

1.HC柳核酸疫苗pCMV.gB質(zhì)粒的構(gòu)建:以pCAGGS.gB質(zhì)粒和pcDNA3為模板，分別用BamHI/EcoRI雙酶切，將酶切產(chǎn)物連接，轉(zhuǎn)化，挑取陽性菌落，提取質(zhì)粒，分別用Ec0RI和BamHI進行酶切鑒定，電泳結(jié)果如圖1一2所示，可見切開的兩條陽性條帶，證實pCMV.gB質(zhì)粒構(gòu)建成功。圖1一2EeoRI/BamHI酶切pCMv.gB載體;F191一2.pCMV.gBveetoreutedbyEeoRI/BamHI;Ml:入Hind111DNAMarker;MZ:DL2000DNAMarker;l:pCMV.gB/EeoRI/BamHI:2:pCMV.gB/BamHI;3:pCMV.gB/EeoRI;2.小鼠一般狀況檢測結(jié)果:免疫組小鼠一般狀況良好，，精神、飲食、皮毛、分泌物等情況與正常對照組小鼠無顯著性差異;分別于0、2、4、6、8、10周測定免疫小鼠的體重，并繪制增長曲線，體重隨著時間的延長而增長，但兩組之間無差異;說明HCMVgB核酸疫苗對免疫小鼠無毒性。圖1一3免疫小鼠體重曲線Figl一3.The份eightofmiee
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號】：R392

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 周天戟,張雪怡,任中原;原位ELISA法在抗巨細(xì)胞病毒藥物篩選中的應(yīng)用[J];華北煤炭醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2000年04期

2 黃文杰,劉志紅,周錫鵬,卜鳳榮,黃祥端,馬立人;人巨細(xì)胞病毒ISCOMs的研制[J];中國生物制品學(xué)雜志;1998年01期

本文編號：2517231