【摘要】：目的：探討人骨髓間充質(zhì)干細胞是否具有向胰島β樣細胞分化的潛能，能否用于治療1型糖尿病。 方法：在無菌條件下，通過羥乙基淀粉分離法及貼壁篩選法從人骨髓中分離間充質(zhì)干細胞，進行體外培養(yǎng)、傳代，并對其表面標(biāo)記進行流式細胞術(shù)檢測。取第3代人骨髓間充質(zhì)干細胞(hBMMSCs)用表皮生長因子、β-巰基乙醇和高糖培養(yǎng)基誘導(dǎo)其向胰島β樣細胞分化。觀察hBMMSCs在誘導(dǎo)前后的形態(tài)變化；用RT-PCR法檢測誘導(dǎo)前后的細胞是否表達胰島相關(guān)基因；用胰島素免疫細胞化學(xué)染色及免疫熒光法檢測胰島素的表達；用雙硫腙染色鑒定胰島β樣細胞；化學(xué)發(fā)光法檢測誘導(dǎo)前及誘導(dǎo)后的細胞分泌胰島素的情況；胰島素釋放實驗評價誘導(dǎo)后細胞的功能；制作糖尿病小鼠模型，并將誘導(dǎo)后的細胞移植到小鼠腎被膜下，觀察血糖變化，摘除其腎臟和胰腺進行免疫組化檢測。 結(jié)果：采用羥乙基淀粉分離法及貼壁篩選法對hBMMSCs進行體外培養(yǎng)，可以得到形態(tài)均一的梭形hBMMSCs，其細胞表面標(biāo)記CD34、CD45、CD14不表達，而CD29、CD44呈陽性表達。hBMMSCs經(jīng)誘導(dǎo)分化后，細胞逐漸變圓，并聚集成團；RT-PCR法檢測顯示誘導(dǎo)后的細胞表達部分胰島相關(guān)基因，如pdx-1、insulin、glut-2等等，，不表達glucagon；胰島素免疫細胞化學(xué)及免疫熒光檢測均表明細胞團內(nèi)的細胞呈胰島素染色陽性反應(yīng)；雙硫腙染色也為陽性；化學(xué)發(fā)光免疫分析法結(jié)果表明經(jīng)誘導(dǎo)的細胞團能分泌胰島素，具有糖反應(yīng)性，但稍弱；誘導(dǎo)后的細胞移植到糖尿病小鼠體內(nèi)后，小鼠的血糖逐漸下降：移植物的胰島素免疫組織化學(xué)染色顯示小鼠腎被膜下有胰島素陽性細胞。而注射PBS組和單純STZ造模組糖尿病小鼠則持續(xù)高血糖。 結(jié)論：人骨髓間充質(zhì)干細胞可在體外被定向誘導(dǎo)分化為胰島β樣細胞，而且這種胰島β樣細胞在1型糖尿病小鼠體內(nèi)具有降血糖的作用。
文內(nèi)圖片：
圖片說明： 、之5〔卜4臺仁﨎山心爭護tt、

本文編號：2515566