【摘要】：本文通過離體原代培養(yǎng)的小鼠脾臟B淋巴細胞和小鼠為實驗對象,運用細胞培養(yǎng)、流式細胞分析、激光共聚焦顯微鏡分析等免疫學(xué)和細胞學(xué)技術(shù),綜合研究和觀察了hsBLys在離體和在體條件下對B淋巴細胞的增殖、存活和分化的活性作用及其胞內(nèi)Ca~(2+)信號變化,從多個角度探討了hsBLyS對免疫細胞特別是B淋巴細胞的發(fā)育分化乃至整體免疫系統(tǒng)的調(diào)控作用及其作用機制。結(jié)果如下: 1 hsBLyS對離體脾B淋巴細胞增殖及存活的影響 用帶有抗CD19的磁珠分離脾臟的B淋巴細胞,調(diào)整細胞濃度至1×10~5個/ml,適應(yīng)性培養(yǎng)4h后加入hsBLyS或/和anti-IgM的不同濃度的工作液,繼續(xù)培養(yǎng)一定時間后MTT法檢測光吸收值。結(jié)果表明:hsBLys單刺激能夠誘導(dǎo)B淋巴細胞增殖,且hsBLyS在0.5-2μg/ml濃度范圍內(nèi)隨著濃度升高而加強;hsBLyS+anti-IgM共刺激脾臟B細胞雖沒有增殖,但進一步在LPS刺激后表現(xiàn)出增殖明顯升高,其刺激指數(shù)極顯著高于對照組:hsBLyS在體外可以延長B淋巴細胞的存活時間。提示:hsBLyS能夠誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的脾臟B淋巴細胞的存活和增殖,hsBLyS+anti-IgM共同作用能增強B淋巴細胞免疫活性。 2 hsBLyS單體及三聚體對離體脾B淋巴細胞作用比較 用帶有抗CD19的磁珠分離脾臟的B淋巴細胞,調(diào)整細胞濃度至1×10~5個/ml,適應(yīng)性培養(yǎng)4h后加入hsBLyS單體或三聚體以及anti-IgM的不同濃度的工作液,繼續(xù)培養(yǎng)一定時間后MTT法檢測光吸收值。結(jié)果表明:加入hsBLvS三聚體培養(yǎng)的B細胞的增殖活性高于或顯著高于對照組,而加入hsBLvS單體的B細胞與對照組相比變化不明顯。提示:比較hsBLyS單體和三聚體對B淋巴細胞增殖變化,確認hsBLyS主要是以三聚體形式發(fā)揮生物學(xué)活性。 3 hsBLyS對離體脾臟B淋巴細胞分化的作用 實驗分兩個系列。系列一:將分離的脾臟細胞懸液加入24孔細胞培養(yǎng)板,隨機分為對照組、2.5μg/ml hsBLyS組、2.5μg/ml anti-IgM組和2.5μg/mlhsBLyS+2.5μg/ml anti-IgM組,每組3個平行孔,分別加入PBS、hsBLyS和/或anti-IgM工作液,培養(yǎng)72h。系列二:分組同系列一,只是在加入工作液培養(yǎng)24h之后,吸去各孔上清再加入LPS繼續(xù)培養(yǎng)48h。培養(yǎng)結(jié)束后,各孔加入anti-CD45R/B220和anti-CD21單克隆熒光抗體標記,流式細胞儀分析hsBLyS對B淋巴細胞分化的影響。結(jié)果表明:加入hsBLyS誘導(dǎo)B淋巴細胞總體數(shù)量明顯高于對照組;B220~+CD21~(lo)B淋巴細胞(T1 B淋巴細胞)數(shù)量雖略高于對照
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圖片說明： 細胞和不成熟B細胞的分化是抗原非依賴的，其分化過程在骨髓中進行�？乖蕾囯A段是指成熟B細胞在抗原刺激后活化，并繼續(xù)分化為合成和分泌抗體的漿細胞，這個階段的分化主要是在外周免疫器官中進行的(圖1一1)l’，2一5]。圖1一IB細胞的成熟過程:在抗原非依賴階段，骨髓中的B細胞開始表達gIM和gID;然后這些B細胞遷移至脾臟中繼續(xù)發(fā)育，其中只有10%的B細胞得以從陽性刪除中存活。B細胞在脾臟中發(fā)育成熟，，如果沒有可溶性抗原和TH細胞的共同作用，這些B細胞將因為無法活化而只能生存很短時間。一旦得到活化，活化的B細胞將在二級淋巴器官中增殖，分化為漿細胞和記憶B細胞
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圖片說明： 、夕圖1一ZB細胞過渡形態(tài)的分化。IM:不成熟B細胞(immaLtUeBeesll);Tl:immaLt珍ertansitionaltyPel:T2二InunaturertansitionalytPeZ;MZ:marginalzone;FO:ofllieular;Ae:activatedBeell;M:memoyrBeell:PC:PlasmaeellZB細胞的活化成熟B細胞的活化、增殖需要抗原的誘導(dǎo)。根據(jù)誘導(dǎo)抗原類型的不同，B細胞可呈現(xiàn)不同的活化方式(表1一l)[，o，川。表1一1Prope-tliesofT一cell刁ePendentandT一eell一indePendentantigcnsPorPerytTDantigensTlantigens介Pel竹PeZChemiealnatureSolublePorteinYesYesyesNosotyPeswitchingB朗terialCell一walleomPonenst(e.g.，LPS)N0PolymeriePoretninatigens;cPausarlpolyasceharidesLimited000NNNAffiniytmUatartionImmunologiememoyrPolyelonalaetivationN0N0Yesh(ihgdose).21TD一Ag誘導(dǎo)的活化自然情況下，多數(shù)抗原是TD一Ag(Teelldependentnati羅ne)，所以B細胞活化多需TH細胞的輔助。B細胞吞噬能力較弱，但其表面gI是高親和力的抗原受體
【學(xué)位授予單位】：南京師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號】：R392

【參考文獻】

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本文編號：2513643