【摘要】： 目的:(1)為開展腎移植的移植免疫研究,建立大鼠同種異體腎移植模型。(2)監(jiān)測血清Th1/Th2細胞因子水平及其在移植腎組織中的mRNA表達在大鼠同種異體腎移植中的動態(tài)變化,研究其預測排斥反應(yīng)與免疫耐受的價值。(3)監(jiān)測CD4+CD25+T調(diào)節(jié)細胞(regulatory T cells,TR)在大鼠同種異體腎移植外周血中的動態(tài)變化,研究其在預測排斥反應(yīng)和免疫耐受中的價值。(4)應(yīng)用器官移植中最常用的免疫抑制劑環(huán)孢素A(Cyclosporin,CsA)聯(lián)合供體骨髓細胞(donor bone marrow cells,DBMC)輸注誘導大鼠同種異體腎移植免疫耐受,以探討其誘導免疫耐受的機理并為臨床腎移植工作提供實驗依據(jù)。 方法:(1)Wistar大鼠為供體,SD大鼠為受體。采用左側(cè)腎移植法,供體腎帶瓣動脈與受體腹主動脈端-側(cè)吻合,供體左腎靜脈上方下腔靜脈斷端與受體下腔靜脈端-側(cè)吻合,供體輸尿管帶膀胱瓣與受體膀胱吻合。(2)ELISA測定血清中細胞因子IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10的表達水平;實時定量RT-PCR(Real- time quantitative reverse transcription PCR )監(jiān)測IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10 mRNA在移植腎組織中的表達。(3)流式細胞術(shù)(flow cytometry,FCM)監(jiān)測CD4+CD25+ TR細胞在大鼠同種異體腎移植外周血中的動態(tài)變化。(4)應(yīng)用CsA聯(lián)合DBMC輸注誘導大鼠同種異體腎移植免疫耐受:觀察生存時間(d);應(yīng)用全自動生化分析儀檢測移植腎受體血清肌酐(Cr)的動態(tài)變化;ELISA測定血清中細胞因子IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10的水平;實時定量RT-PCR監(jiān)測IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10 mRNA在移植腎組織中的表達(術(shù)后7d);流式細胞術(shù)監(jiān)測CD4+CD25+ TR細胞在外周血中的變化;單向混合淋巴細胞反應(yīng)(MLR)了解免疫耐受的特異性;移植腎病理檢查,判斷排斥反應(yīng)的程度。 結(jié)果:(1)建立了一種穩(wěn)定、實用的改良性大鼠同種異體腎移植動物模型。腎靜脈吻合時間平均(18±1.5)min,動脈吻合時間平均(15±1.0)min,總手術(shù)時間平均(135±22)min。熱缺血時間5s,冷缺血時間40~45min。(2)Th1細胞因子IL-2、INF-γ在大鼠同種異體腎移植中,無論在血清中的表達水平或在移植腎組織中的mRNA表達水平與同系對照組及CsA組比較均顯著升高,而與此對應(yīng)Th2細胞因子IL-4、IL-10顯著降低。(3)CD4+CD25+ TR細胞在大鼠同種異體腎移植急性排斥反應(yīng)過程中明顯低于同系對照組;而CsA組CD4+CD25+ TR細胞明顯高于同系對照組。(4)CsA聯(lián)合供體骨髓細胞可成功誘導大鼠同種異體腎移植免疫耐受。CsA聯(lián)合供體骨髓細胞組與單純CsA組比較生存時間明顯延長;血清Th1細胞因子(IL-2、IFN-γ)及其在移植腎中的mRNA表達下降、血清Th2細胞因子(IL-4、IL-10)及其在移植腎中的mRNA表達升高,即Th1細胞因子向Th2細胞因子偏移;外周血CD4+CD25+ TR細胞比例升高;MLR實驗結(jié)果表明CsA聯(lián)合DBMC組與單純CsA組比較,受體僅對供體特異性免疫反應(yīng)降低,而對第三品系仍存在高免疫反應(yīng)性;移植腎病理提示CsA聯(lián)合DBMC組與單純CsA組比較,排斥反應(yīng)降低。 結(jié)論:(1)通過改良方法建立的大鼠同種異體腎移植模型是一種成功率較高、手術(shù)方法容易掌握的動物模型。(2)動態(tài)監(jiān)測Th1/Th2細胞因子在外周血清中的濃度或其mRNA在移植腎組織中的表達水平可預測和判斷急性排斥反應(yīng)的發(fā)生,Th1細胞因子水平升高提示受體與移植腎之間存在高免疫反應(yīng)狀態(tài),有發(fā)生急性排斥反應(yīng)的可能;Th2細胞因子水平升高提示受體與移植腎之間存在低免疫反應(yīng)或耐受狀態(tài)。(3)CD4+CD25+ TR細胞在抑制腎臟移植排斥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用,動態(tài)監(jiān)測外周血中CD4+CD25+ TR細胞的水平可預測和判斷急性排斥反應(yīng)的發(fā)生,了解腎臟移植后受體和移植腎之間的免疫反應(yīng)程度或耐受狀態(tài)。(4)CsA聯(lián)合供體骨髓細胞可成功誘導大鼠同種異體腎移植免疫耐受。其機理與Th1細胞因子向Th2細胞因子偏移、受體內(nèi)CD4+CD25+ TR細胞比例升高有關(guān)。
文內(nèi)圖片：
圖片說明：供體大鼠腹部“十”字形切口
文內(nèi)圖片：
圖片說明：大鼠左側(cè)腎臟正常位置及左腎靜脈與下腔靜脈的解剖關(guān)系
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R699.2;R-332

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 馮嘉瑜,張艮甫,黃赤兵,張寅生,賀偉峰,吳軍;改良的大鼠原位腎移植模型的建立[J];第三軍醫(yī)大學學報;2004年24期

2 黃赤兵,方玉華,吳軍,羅高興,曹川,馬兵;應(yīng)用新技術(shù)建立大鼠腎移植模型[J];中華器官移植雜志;2001年02期

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本文編號：2513193