【摘要】：非病毒DNA遞送系統(tǒng)(nonviral DNA delivery system)已經(jīng)成為基因治療的有力工具。良好的非病毒DNA遞送系統(tǒng)應(yīng)該能夠有效地穿透細(xì)胞膜，并把DNA轉(zhuǎn)運(yùn)到靶細(xì)胞內(nèi)部。非病毒DNA遞送系統(tǒng)的詳細(xì)轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制目前還不太清楚，但它們都涉及到DNA縮合(DNA condensation)過程——被遞送的DNA都要經(jīng)歷一個塌陷縮合成緊密有序的，僅由一到幾個DNA分子組成的納米微粒的過程。研究表明DNA縮合能夠提高DNA的物理化學(xué)穩(wěn)定性；另外由于可以使DNA縮合體表面的zeta電位為正值，而細(xì)胞表面帶負(fù)電荷，使得DNA縮合體(DNA condensates)的轉(zhuǎn)染效率大大提高。本研究的目的是利用DNA縮合技術(shù)把反義核苷酸(Antisense oligodeoxynucleotides，ASON)遞送到腫瘤細(xì)胞內(nèi)部。這種反義核苷酸能夠與人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶的mRNA(human telomerase reverse transcriptase mRNA，hTERT mRNA)互補(bǔ)，抑制人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶的表達(dá)，從而在基因水平上達(dá)到抑制腫瘤的目的。 本研究分為三部分。第一部分考察了聚賴氨酸(Poly-L-Lysine，PLL)誘導(dǎo)的反義核苷酸縮合，研究了各因素對縮合體的影響。第二部分設(shè)計(jì)了一條含有16個賴氨酸和一個NGR功能基團(tuán)的多肽，制備了反義核苷酸靶向納米縮合體。此NGR功能基團(tuán)含有的NGR基序是氨基肽酶配體，能夠靶向新生血管內(nèi)皮細(xì)胞。第三部分的細(xì)胞學(xué)初步研究證明反義核苷酸靶向納米縮合體能夠有效地轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞。
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圖片說明： 圖1NDA縮合體示意圖聚賴氨酸(Poly一L一Lysine，PLL)誘導(dǎo)的反義核昔oetides，ASNO)縮合現(xiàn)象進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究0:v的反義核昔酸一聚賴氨酸縮合體(ASOND一PLL核昔酸或者聚賴氨酸，從而生成帶正電荷或者反義核昔酸一聚賴氨酸縮合體。根據(jù)這個研究結(jié)的、ezat電位是O釁的反義核昔酸一聚賴氨酸129.3.，ezat電位為34.88耐的反義核昔moleeularass，bly)。并對其反義核昔酸、NGR予核酸酶降解的能力進(jìn)行了研究。此反義核昔酸治療所用NDA。
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圖片說明： 3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果.31編合體的粒徑和耽扭電位各組縮合體的粒徑和ezat電位測量結(jié)果見表1。圖2，圖3是正負(fù)電荷比為1.00的縮合體的粒徑分布圖和刀改a電位圖;圖4，圖5是正負(fù)電荷比為.047的縮合體的粒徑分布圖和ezta電位圖。實(shí)驗(yàn)共重復(fù)三次，各測量值是三次實(shí)驗(yàn)結(jié)果的平均值。表1反義核昔酸一聚賴氨酸縮合體制備條件，粒徑和ezat電位組別PH值A(chǔ)SNO濃度(pg/mL)正負(fù)電荷比離子強(qiáng)度粒徑(陰)Zeta電位m(V)2906:00393661655589七..3939--4l0352318063.918.0..4389.06224195--.4--21.29.2.25l2345678910lll2l3l4l57.397。697。546.508.006.806.357.866.227.106.668.146.958.317.2437.68197‘09113.79172.62149.7674.1653.4888.21123‘5699.84206.8764.08136.65161.71183.330.640.75l，220.590.540.961.341.710.840.471.120。931。90l。331.63(mM)2.500.611.610.120.241.1811.55106。8144.1598.698.598.5417.4105.7114.178.278.5122.491.3100.6788.292.3刃.17一35.910.080.08一.4一38.一22.65實(shí)驗(yàn)結(jié)果用SAs作回歸分析，采用逐步回歸法，置信水平為95%，HP值在.622到.831范圍內(nèi)
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：R346

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 朱振洪,金勇豐,張耀洲;腫瘤基因治療的研究進(jìn)展[J];生物學(xué)雜志;2001年03期

2 方開泰;均勻設(shè)計(jì)——數(shù)論方法在試驗(yàn)設(shè)計(jì)的應(yīng)用[J];應(yīng)用數(shù)學(xué)學(xué)報(bào);1980年04期

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本文編號：2513182