發(fā)布時(shí)間：2019-07-11 06:17

【摘要】：轉(zhuǎn)錄因子在多種細(xì)胞功能中擔(dān)任了重要角色,包括細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、調(diào)亡和細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。人們已經(jīng)鑒定了幾個(gè)大的轉(zhuǎn)錄因子家族。在哺乳動(dòng)物中,鋅指蛋白是最龐大的家族。研究表明,鋅指因子能調(diào)節(jié)多種在心臟表達(dá)的基因。為了研究與心臟發(fā)育和心臟疾病相關(guān)的基因,我們從人類胚胎心臟cDNA文庫(kù)中分離并鑒定了一個(gè)新的鋅指基因,經(jīng)國(guó)際基因命名委員會(huì)批準(zhǔn)命名為ZNF641。ZNF641定位在染色體12q13.11區(qū)帶,含一個(gè)KRAB-A框和5個(gè)C_2H_2型鋅指。其cDNA全長(zhǎng)4906個(gè)堿基,含一個(gè)1317堿基的開放閱讀框,編碼一個(gè)由438個(gè)氨基酸組成,分子量為49.5 kDa的蛋白。Northern雜交分析表明ZNF641在成人組織中廣泛表達(dá),其中,在骨骼肌組織有高度表達(dá),在心臟、肝臟和胰腺中有中度表達(dá),在大腦,腎臟和肺中沒有表達(dá)。通過構(gòu)建增強(qiáng)型綠色熒光蛋白與ZNF641融合基因的真核表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染COS-7細(xì)胞系,瞬時(shí)表達(dá)后用熒光顯微鏡觀察ZNF641融合蛋白的活細(xì)胞定位及表達(dá),證明ZNF641蛋白在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中均有表達(dá)。報(bào)告基因分析證明ZNF641是一個(gè)轉(zhuǎn)錄激活因子,結(jié)構(gòu)域分段分析表明ZNF641的KRAB-A框和C_2H_2鋅指之間的連接部分(linker)是其轉(zhuǎn)錄激活的關(guān)鍵序列,可能是一個(gè)新的轉(zhuǎn)錄激活子。ZNF641在COS-7細(xì)胞中過表達(dá)能激活轉(zhuǎn)錄因子AP-1與SRE的活性,這兩種因子是MAPK信號(hào)途徑介導(dǎo)的重要因子,說明ZNF641蛋白可能在MAPK信號(hào)途徑中作為激活因子介導(dǎo)細(xì)胞功能。綜合該基因的結(jié)構(gòu)和表達(dá)特征,我們初步得出結(jié)論認(rèn)為:ZNF641是參與多種人類胚胎器官發(fā)生
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圖片說明： 設(shè)計(jì)PCR反應(yīng)引物獲得該基因的開放閱讀框(O盯)后，在其5’端設(shè)計(jì)一個(gè)嵌套5，RACEPCR的引物進(jìn)行5，RACE擴(kuò)增，，結(jié)果獲得一個(gè)長(zhǎng)度約為560bp的PCR產(chǎn)物【圖2一11。另外，在其3’端設(shè)計(jì)一個(gè)嵌套3，RACEPCR的引物進(jìn)行了3，RACE擴(kuò)增，結(jié)果獲得一個(gè)長(zhǎng)度約為400bp的pCR產(chǎn)物[圖2一1]。經(jīng)純化，pMD18一T載體連接，圖2一1NZF6415氣ARCE一pcR和3、以eE一pCR擴(kuò)增結(jié)果.其中1號(hào)泳道為56obp的5’一ARcE一PcR產(chǎn)物純化結(jié)果;2號(hào)泳道為400Pb的3’一ARCE一PCR產(chǎn)物純化結(jié)果;3號(hào)泳道為marker。轉(zhuǎn)化，測(cè)序，從而獲得完整的基因cDNA序列。該基因全長(zhǎng)為4906bp
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圖片說明： 獲得GeBnnak編號(hào)為AY842285。此基因共編碼438個(gè)氨基酸，蛋白質(zhì)大小約4.95kD。起始密碼子開始于717，終止密碼子位于2033，其核昔酸和蛋白質(zhì)序列見圖2一ZA。據(jù)SMARI，程序分析，此基因編碼的蛋白質(zhì)在氮末端有1個(gè)KRAB框，在碳末端有5個(gè)連續(xù)的鋅指【圖2一ZB]，搜索坦必鮑絲塑迷達(dá)璧叢創(chuàng)匕可知該基因定位于染色體12q3l.ll的位置，;跨基因組約.10.45kb，屬于鋅指蛋白家族KRABC/2踐亞家族的成員。根據(jù)核昔酸和蛋白質(zhì)的特征，經(jīng)國(guó)際基因命名委員會(huì)批準(zhǔn)，命名為刀W巧甲I。表2一卜NZF641基因的基因組結(jié)構(gòu)助nan
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號(hào)】：R346

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 邢丹;喹賽多相關(guān)鋅指蛋白的表達(dá)調(diào)控與其調(diào)節(jié)基因的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

本文編號(hào)：2512934