發(fā)布時(shí)間：2019-05-10 13:22

【摘要】： 目的: 本實(shí)驗(yàn)采用剛地弓形蟲(chóng)速殖子急性感染BALB/c雄性小鼠,研究弓形蟲(chóng)的雄性生殖毒性:①采用腹腔注射剛地弓形蟲(chóng)速殖子的方法,建立弓形蟲(chóng)急性感染致雄性生殖毒性的小鼠模型:監(jiān)測(cè)弓形蟲(chóng)感染后雄鼠的一般狀況、睪丸重量、附睪重量、精子數(shù)量及形態(tài)的變化,并觀察小鼠睪丸的病理?yè)p傷,確定弓形蟲(chóng)急性感染致小鼠生殖功能損傷的特點(diǎn)。②探討弓形蟲(chóng)感染后小鼠睪丸生精細(xì)胞的損傷以及凋亡相關(guān)蛋白在睪丸細(xì)胞的表達(dá),分析弓形蟲(chóng)感染對(duì)睪丸內(nèi)不同倍體的生精細(xì)胞的損傷是否具有選擇性;③檢測(cè)弓形蟲(chóng)感染后小鼠血清睪酮(T)、促黃體生成素(LH)、睪丸組織內(nèi)T水平的變化,以及生精小管內(nèi)激素受體(LHR、AR)的變化,初步探討弓形蟲(chóng)急性感染對(duì)生殖激素的水平及其作用通路的影響。通過(guò)以上實(shí)驗(yàn),探討弓形蟲(chóng)急性感染致雄性生殖障礙的機(jī)制,為弓形蟲(chóng)致雄性不育制定防治策略提供理論依據(jù)。 方法: (1)監(jiān)測(cè)弓形蟲(chóng)感染后雄鼠的體重、睪丸重量、附睪重量、精子數(shù)量和形態(tài)的變化,并觀察睪丸的病理?yè)p傷。將BALB/c雄鼠隨機(jī)分為6組,每組8只。正常A組:正常對(duì)照組(0.2mlPBS);感染B組:弓形蟲(chóng)感染組(B1組腹腔注射經(jīng)胰酶消化后的弓形蟲(chóng)速殖子2.5×10~3個(gè)/只,B2組注射5×10~3個(gè)/只,B3組注射1×10~4個(gè)/只、B4組注射2×10~4個(gè)/只);陽(yáng)性C組:環(huán)磷酰胺陽(yáng)性對(duì)照組(40 mg/kg)。攻蟲(chóng)后第6天,稱(chēng)小鼠重量,頸椎脫臼法處死小鼠,摘取睪丸、附睪稱(chēng)重,并制備附睪精子懸液,推片、1%伊紅染色,顯微鏡下計(jì)精子數(shù)及觀察精子畸形;睪丸梯度酒精脫水、石蠟包埋、切片(5μm),HE染色,觀察睪丸的損傷情況和計(jì)睪丸生精小管內(nèi)精子數(shù)。 (2)探討弓形蟲(chóng)感染后雄鼠生精細(xì)胞的損傷情況。將BALB/c雄鼠隨機(jī)分為6組,每組10只。正常A組:正常對(duì)照組(0.2ml PBS):感染B組:弓形蟲(chóng)感染B組(B1組腹腔注射經(jīng)胰酶消化后的弓形蟲(chóng)速殖子2.5×10~3個(gè)/只,B2組注射5×10~3個(gè)/只,B3組注射1×10~4個(gè)/只、B4組注射2×10~4個(gè)/只);陽(yáng)性C組:環(huán)磷酰胺陽(yáng)性對(duì)照組(40 mg/kg)。攻蟲(chóng)后第6天,摘取小鼠睪丸,去除表面組織及血跡,一側(cè)睪丸制備睪丸單細(xì)胞懸液,70%冰乙醇固定,次日PI染色、流式細(xì)胞儀檢測(cè);另一側(cè)睪丸梯度酒精脫水、石蠟包埋、切片(5μm),HE染色、病理觀察以及SP法檢測(cè)睪丸內(nèi)Bax和Bcl-2蛋白的表達(dá)。 (3)放射免疫法檢測(cè)弓形蟲(chóng)感染后雄鼠血清T、LH及睪丸組織內(nèi)T的水平,免疫組化sABC法檢測(cè)激素受體(LHR、AR)的變化:實(shí)驗(yàn)鼠分組同前。攻蟲(chóng)后第6天,頸椎脫臼法處死小鼠,摘眼球采血,取血清,-20℃保存,用于測(cè)定小鼠血清T、LH:睪丸制備勻漿后,4℃、8000轉(zhuǎn)/min、離心15min,取上清,-20℃保存,用于測(cè)定睪丸組織內(nèi)T的水平:睪丸組織梯度酒精脫水、石蠟包埋、切片(5μm),sABC法測(cè)定睪丸內(nèi)激素受體(LHR、AR)的變化。 結(jié)果: (1)相對(duì)于正常A組,弓形蟲(chóng)感染組(B1-4)和陽(yáng)性C組小鼠的體重略減輕,但經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。B1-4組及陽(yáng)性C組小鼠的睪丸臟器系數(shù)與正常A組相比明顯減小(P＜0.05),但附睪臟器系數(shù)無(wú)顯著變化(P＞0.05)。B1-4組和陽(yáng)性C組小鼠的生精小管內(nèi)精子數(shù)量減少,與正常A組相比差異顯著(P＜0.05);附睪精子計(jì)數(shù)和畸形率與正常A組相比均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。B1-4組小鼠的睪丸病理切片可見(jiàn)生精小管細(xì)胞層次混亂、細(xì)胞間隙增大、細(xì)胞核凝聚;管腔內(nèi)有細(xì)胞碎片,精子減少甚至缺失,呈生精減少或停滯。 (2)流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)弓形蟲(chóng)感染組(B1-4)和陽(yáng)性C組小鼠的睪丸細(xì)胞均存在明顯的細(xì)胞凋亡。其中以二倍體細(xì)胞凋亡尤為明顯,四倍體細(xì)胞數(shù)量亦顯著減少,與正常A相比差異顯著(P＜0.01),單倍體相對(duì)變化較小:免疫組化檢測(cè):Bcl-2蛋白在B1-4組小鼠睪丸的間質(zhì)和生精小管內(nèi)的表達(dá)變化與正常A組相比無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。Bax在B1-4組小鼠的生精小管表達(dá)明顯增強(qiáng)(P＜0.01),主要集中在精母細(xì)胞層,在精原細(xì)胞、精子細(xì)胞、睪丸間質(zhì)Bax蛋白的變化不明顯。 (3)弓形蟲(chóng)感染組(B1-4)小鼠的血清LH水平與正常A組相比略有降低,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析無(wú)顯著性差異(P＞0.05),其中B1組小鼠的血清LH水平最低,隨著攻蟲(chóng)劑量增加,LH水平有輕微上升趨勢(shì);陽(yáng)性C組小鼠的LH水平與正常A組相比略有升高,亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);B1-4組和陽(yáng)性C組小鼠的血清T水平均有明顯降低,睪丸組織內(nèi)T水平的降低更為明顯,與正常A組相比差異顯著(P＜0.01):LH受體表達(dá)在各組間(A,B1-4,C)無(wú)顯著性差異(P＞0.05),而AR在精母細(xì)胞層表達(dá)明顯增強(qiáng)(P＜0.05)。 結(jié)論: 1.弓形蟲(chóng)急性感染小鼠模型適用于探討弓形蟲(chóng)對(duì)睪丸生精細(xì)胞及體細(xì)胞的損傷機(jī)制,不適用于弓形蟲(chóng)對(duì)成熟精子形態(tài)及其功能影響的研究。 2.弓形蟲(chóng)急性感染致生殖障礙的原因可能是損傷了生精器官-睪丸,致使精子生成障礙、出現(xiàn)少精、無(wú)精,最終導(dǎo)致雄性的生育力下降。 3.弓形蟲(chóng)急性感染引起的睪丸損傷以生精細(xì)胞凋亡為主:凋亡對(duì)單倍體細(xì)胞(精子細(xì)胞)的影響較小;對(duì)二倍體細(xì)胞(次級(jí)精母細(xì)胞)影響明顯,同時(shí)可導(dǎo)致四倍體細(xì)胞(初級(jí)精母細(xì)胞)數(shù)量減少。Bax蛋白在精母細(xì)胞內(nèi)表達(dá)增高明顯,但生精細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞、支持細(xì)胞內(nèi)Bcl-2蛋白的表達(dá)無(wú)明顯改變,說(shuō)明生精細(xì)胞凋亡可能與Bax蛋白的表達(dá)增強(qiáng)有關(guān)。 4.弓形蟲(chóng)急性感染可致雄鼠血清睪酮(T)、睪丸組織內(nèi)T水平降低,并影響到LH的負(fù)反饋?zhàn)饔煤烷g質(zhì)細(xì)胞T的合成。 5.弓形蟲(chóng)急性感染可致生精過(guò)程阻滯于精母細(xì)胞,并且AR在精母細(xì)胞內(nèi)表達(dá)增高,以代償T水平的降低;弓形蟲(chóng)急性感染對(duì)間質(zhì)細(xì)胞LHR的得表達(dá)無(wú)明顯影響。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類(lèi)號(hào)】：R383

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 孫新;剛地弓形蟲(chóng)懸浮和粘附細(xì)胞培養(yǎng)的比較研究[J];蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1995年01期

2 翁少鵬;剛地弓形蟲(chóng)微孔的內(nèi)噬作用[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).寄生蟲(chóng)病分冊(cè);1995年01期

3 劉霞 ,沈大康;剛地弓形蟲(chóng)三毒力株的生長(zhǎng)特性[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).寄生蟲(chóng)病分冊(cè);1998年03期

4 毛佐華;剛地弓形蟲(chóng)肌動(dòng)蛋白解聚因子的克隆及特性[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).寄生蟲(chóng)病分冊(cè);1998年03期

5 張愛(ài)民,張亞莉,李軍;VB環(huán)境下剛地弓形蟲(chóng)多媒體課件的開(kāi)發(fā)[J];同濟(jì)大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2001年05期

6 張曉麗;剛地弓形蟲(chóng)排泄-分泌抗原(ESA)的蛋白組成及免疫化學(xué)特性[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).寄生蟲(chóng)病分冊(cè);2002年01期

7 王琴美;;慢性剛地弓形蟲(chóng)感染小鼠的腦氨肽酶活力[J];國(guó)際醫(yī)學(xué)寄生蟲(chóng)病雜志;1990年01期

8 徐大為;剛地弓形蟲(chóng)的嘧啶補(bǔ)救途徑[J];國(guó)際醫(yī)學(xué)寄生蟲(chóng)病雜志;1993年05期

9 劉漢鈞，錢(qián)緯，韓丹，，黎冠群，危群;人弓形蟲(chóng)淋巴結(jié)炎－例報(bào)告[J];昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1994年04期

10 鄧艷琴;感染剛地弓形蟲(chóng)豬體內(nèi)抗體水平與所分離蟲(chóng)株致病性的關(guān)系[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).寄生蟲(chóng)病分冊(cè);1995年02期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 張燕君;杜一;王登宇;崔海音;孫冰玉;孔維華;;前列腺素E合成酶cPGES在小鼠睪丸中的表達(dá)及熱激后變化[A];2008年神經(jīng)內(nèi)分泌暨神經(jīng)免疫內(nèi)分泌學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要匯編[C];2008年

2 吳盼;季宇彬;郎朗;;線(xiàn)粒體對(duì)生精細(xì)胞凋亡的調(diào)控[A];中國(guó)藥理學(xué)會(huì)第六屆生殖藥理學(xué)專(zhuān)業(yè)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要匯編[C];2009年

3 施玉j;白俊平;王文萍;;人精子膜的離子通道和男性抗生育中藥對(duì)生精細(xì)胞Ca~(2+)通道的抑制[A];中國(guó)生理學(xué)會(huì)第21屆全國(guó)代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2002年

4 劉美玲;;大鼠睪丸特異表達(dá)基因LM23的鑒定和分析[A];第一屆中華醫(yī)學(xué)會(huì)生殖醫(yī)學(xué)分會(huì)、中國(guó)動(dòng)物學(xué)會(huì)生殖生物學(xué)分會(huì)聯(lián)合年會(huì)論文匯編[C];2007年

5 張春影;姜楊;張海峰;袁譚;;壬基酚致大鼠生精細(xì)胞凋亡與Caspase-3蛋白的表達(dá)[A];第十五屆全國(guó)泌尿外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2008年

6 俞作仁;關(guān)紀(jì)奎;葛曄華;馬靜;郭睿;李賽;薛社普;韓代書(shū);;小鼠精子發(fā)生不同階段生精細(xì)胞的基因表達(dá)譜-精子細(xì)胞變態(tài)相關(guān)基因的研究[A];解剖學(xué)雜志——中國(guó)解剖學(xué)會(huì)2002年年會(huì)文摘匯編[C];2002年

7 于潔;蔡志明;葉靜;張芳婷;萬(wàn)匯涓;朱輝;龍?jiān)?桂耀庭;房家智;;生精細(xì)胞異體異位生長(zhǎng)發(fā)育的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究[A];21世紀(jì)男科學(xué)——中華醫(yī)學(xué)會(huì)第五次全國(guó)男科學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2004年

8 李健;陳耀星;王子旭;董玉蘭;白永平;;油茶皂素對(duì)小鼠生精和氧化損傷的影響[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物解剖學(xué)及組織胚胎學(xué)分會(huì)第十五次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

9 卞廷松;賴(lài)仁勝;徐福松;朱長(zhǎng)樂(lè);;睪丸生精障礙性不育癥患者的生精細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)研究[A];新編男科理論與臨床——中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)第七屆中醫(yī)男科學(xué)術(shù)大會(huì);全國(guó)中醫(yī)男科臨床與科研方法高級(jí)研修班;2006年云南省中醫(yī)男科診療技術(shù)培訓(xùn)班講義與論文集[C];2006年

10 季宇彬;吳盼;郎朗;;線(xiàn)粒體對(duì)生精細(xì)胞凋亡的調(diào)控[A];全國(guó)第十一屆生化與分子藥理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 南京醫(yī)科大學(xué)附屬南京市婦幼保健院泌尿男科 潘連軍 博士;尿不濕會(huì)引發(fā)不育?[N];健康時(shí)報(bào);2010年

2 蔣明 戴勁松;手機(jī)輻射被證實(shí)會(huì)損傷生殖細(xì)胞[N];新華每日電訊;2005年

3 梅琳達(dá)·溫納 韓彥文 譯;誰(shuí)是精神病的罪魁禍?zhǔn)譡N];衛(wèi)生與生活報(bào);2010年

4 盧佳;中醫(yī)調(diào)攝男性不育癥6點(diǎn)建議[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2006年

5 主任醫(yī)師 王有國(guó);孕前男女防七害[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2002年

6 記者　馬霞;含氟牙膏應(yīng)有警示標(biāo)志[N];科技日?qǐng)?bào);2006年

7 張國(guó)勝;四大元素男性不可缺[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2007年

8 王有國(guó);優(yōu)生從孕育胎兒前做起[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2000年

9 蔣明;湖北攻關(guān)課題：發(fā)現(xiàn)枸杞子對(duì)受損生殖系統(tǒng)保護(hù)原理[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2005年

10 辛才林;良好生活習(xí)慣促進(jìn)男性生殖健康[N];家庭醫(yī)生報(bào);2006年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 王濤;TLR3在小鼠生精細(xì)胞中的表達(dá)及功能[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

2 徐健;小鼠睪丸生殖細(xì)胞凋亡及相關(guān)基因調(diào)控的研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1999年

3 高劍;剛地弓形蟲(chóng)誘導(dǎo)小鼠結(jié)腸癌ct26細(xì)胞周期阻滯及相關(guān)的抗癌作用[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

4 熊偉鵬;Sertoli細(xì)胞吞噬凋亡生精細(xì)胞的機(jī)理和意義[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2009年

5 張曉艷;Toll樣受體在小鼠受損生精細(xì)胞誘導(dǎo)睪丸炎癥反應(yīng)中的功能[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

6 崔光輝;棉酚與甾體激素聯(lián)合用藥對(duì)大鼠生精細(xì)胞凋亡相關(guān)基因表達(dá)及生精干細(xì)胞功能的影響[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2004年

7 喬原;大鼠精子發(fā)生相關(guān)基因rtSH3p13的功能研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2003年

8 俞作仁;小鼠精子發(fā)生不同階段生精細(xì)胞基因表達(dá)譜的研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2003年

9 劉光偉;低劑量電離輻射對(duì)小鼠睪丸生精細(xì)胞凋亡的影響及其基因調(diào)控[D];吉林大學(xué);2004年

10 祝輝;人精子發(fā)生相關(guān)基因NYD-SP6的功能研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2006年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 裴洪崗;黃芪對(duì)隱睪大鼠生精細(xì)胞凋亡的作用[D];江西醫(yī)學(xué)院;2004年

2 徐會(huì)茹;抗FSH自身抗體對(duì)雄性生殖系統(tǒng)的影響及其作用機(jī)制的初步研究[D];南京師范大學(xué);2007年

3 李桂玲;槲皮素對(duì)己烯雌酚致倉(cāng)鼠生精損害的緩解作用[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

4 楊瑞;剛地弓形蟲(chóng)致小鼠睪丸生精細(xì)胞損傷機(jī)制的探討[D];山西醫(yī)科大學(xué);2007年

5 劉智深;剛地弓形蟲(chóng)致BALB/c小鼠睪丸細(xì)胞損傷作用的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2008年

6 王尚尚;兩株豬源剛地弓形蟲(chóng)的分離及其生物學(xué)特性的研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2012年

7 孫靜波;不同培養(yǎng)方法和細(xì)胞因子對(duì)小鼠生精細(xì)胞的增殖分化效應(yīng)[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2011年

8 朱勤;兩種環(huán)境內(nèi)分泌干擾物對(duì)小鼠生精細(xì)胞T型Ca~(2+)通道的作用研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2011年

9 岳紅霞;長(zhǎng)春地區(qū)孕婦弓形蟲(chóng)感染蟲(chóng)株的基因分型[D];吉林大學(xué);2011年

10 王芬;剛地弓形蟲(chóng)磷酸甘油酸變位酶2基因的生物信息學(xué)分析、克隆表達(dá)及免疫保護(hù)性研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2011年

本文編號(hào)：2473679