【摘要】：目的獲得高純度B、C基因型乙型肝炎病毒X蛋白(HBx蛋白)。方法PCR擴(kuò)增獲得B、C基因型乙型肝炎病毒X基因,以AgeⅠ及BglⅡ位點(diǎn)將其克隆入果蠅表達(dá)載體pMT/BiP/V5/HisC。重組載體與篩選質(zhì)粒pCoBlast以脂質(zhì)體Cellfectine共轉(zhuǎn)染果蠅S2細(xì)胞,25μg/ml Blasticidin篩選多克隆抗性細(xì)胞株。擴(kuò)增細(xì)胞以CuSO4誘導(dǎo)HBx蛋白表達(dá),Western blot鑒定表達(dá)產(chǎn)物并確定最佳蛋白表達(dá)時(shí)間和誘導(dǎo)濃度。200 ml大規(guī)模培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)表達(dá),一步法及兩步法分別純化B、C基因型HBx蛋白。結(jié)果成功構(gòu)建重組表達(dá)載體pMT/BiP-HBxb(含B基因型HBx基因)和pMT/BiP-HBxc(含C基因型HBx基因)。在果蠅S2細(xì)胞中,B、C基因型HBx蛋白與6×His融合表達(dá)(分別為HBxb-His及HBxc-His),在CuSO4誘導(dǎo)后72 h以及誘導(dǎo)濃度為500μmol/L~1 mmol/L時(shí)蛋白表達(dá)量最高。在200 ml培養(yǎng)液中,一步法純化所得HBxb-His及HBxc-His蛋白總量分別為1.52和1.37 mg,純度為85.23%和84.59%;二步法所得的HBxb-His及HBxc-His蛋白總量分別為5.38和6.42 mg,純度分別為95.36%和94.62%。結(jié)論在果蠅表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)并獲得高純度B、C基因型乙型肝炎病毒X蛋白,為進(jìn)一步探討結(jié)構(gòu)和功能的關(guān)系奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to obtain high purity B, C genotype hepatitis B virus X protein (HBx protein). Methods the B, C genotype hepatitis B virus X gene was amplified by PCR and cloned into Drosophila expression vector pMT/BiP/V5/HisC. by Age 鈪，

本文編號(hào)：2446690