【摘要】：目的制備與鑒定神經(jīng)干細(xì)胞特異性PPARγ基因敲除小鼠模型。方法將引進(jìn)的2種轉(zhuǎn)基因小鼠B6.PPARγloxp/loxp、B6.Nestin-Cre進(jìn)行飼養(yǎng)并雜交繁殖,將子一代小鼠與B6.PPARγloxp/loxp小鼠回交獲得子二代小鼠,提取子二代小鼠的基因組DNA,利用PCR方法擴(kuò)增Cre和loxp基因片段,并進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測。選取基因型為B6.PPARγloxp/loxp.Nestin-Cre(KO)的小鼠即為神經(jīng)干細(xì)胞特異性敲除PPARγ的敲除小鼠,另選基因型為B6.PPARγloxp/loxp(loxp)作為對(duì)照組小鼠。應(yīng)用RT-PCR、實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法鑒定神經(jīng)干細(xì)胞特異性敲除PPARγ的敲除小鼠。結(jié)果敲除小鼠在基因鑒定時(shí)可以擴(kuò)增得到PPARγloxp和Cre兩個(gè)條帶,在mRNA表型檢測時(shí)腦內(nèi)PPARγ表達(dá)顯著低于對(duì)照組小鼠。成功獲得神經(jīng)干細(xì)胞敲除PPARγ基因的敲除小鼠。所購2種轉(zhuǎn)基因小鼠均有繁殖能力,其繁殖符合孟德爾遺傳規(guī)律。結(jié)論基于loxp-Cre系統(tǒng)成功構(gòu)建神經(jīng)干細(xì)胞特異性敲除PPARγ的基因敲除小鼠,為進(jìn)一步的神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療及其機(jī)制研究提供模型基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to prepare and identify neural stem cell specific PPAR 緯 gene knockout mouse model. Methods two kinds of transgenic mice B6.PPAR 緯 loxp/loxp,B6.Nestin-Cre were bred and hybridized. The second generation mice were obtained by backcross between the first generation mice and the B6.PPAR 緯 loxp/loxp mice. The genomic DNA, of the second generation mice was extracted from the second generation mice. Cre and loxp gene fragments were amplified by PCR and detected by agarose gel electrophoresis. Mice with B6.PPAR 緯 loxp/loxp.Nestin-Cre (KO) genotype were selected as neural stem cell specific knockout mice with PPAR 緯 knockout, and B6.PPAR緯 loxP / loxp (loxp) as control mice. RT-PCR, real-time fluorescence quantitative PCR was used to identify neural stem cell specific knockout PPAR 緯 knockout mice. Results two bands of PPAR 緯 loxP and Cre were amplified in knockout mice during gene identification, and the expression of PPAR 緯 in brain was significantly lower than that in control mice when detected by mRNA phenotype. The knockout mice with PPAR 緯 gene knockout from neural stem cells were successfully obtained. The two transgenic mice had reproductive ability, and their reproduction was in accordance with Mendelian heredity law. Conclusion Gene knockout mice with neural stem cell specific knockout of PPAR 緯 are successfully constructed based on loxp-Cre system, which provides a model basis for further research on the treatment and mechanism of nervous system diseases.
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院神經(jīng)生物學(xué)教研室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81071016)~~
【分類號(hào)】：R-332

【共引文獻(xiàn)】

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7 王sユ，

本文編號(hào)：2446482