【摘要】：目的利用大腸桿菌重組表達金黃色葡萄球菌(SAU)重要的外分泌毒力因子α-溶血素(alpha hemolysin,Hla),檢測Hla蛋白對不同種屬紅細胞的裂解作用;制備其特異性抗體,并檢測抗體的中和活性。方法以SAU NCTC-8325菌株基因組為模板,PCR擴增hla基因,構建重組表達載體p ET-28a-Hla,轉化大腸桿菌BL21(DE3),利用IPTG誘導表達,通過Ni2+柱親和純化獲得Hla蛋白;通過紅細胞裂解實驗測定Hla蛋白的溶血活性。結果重組Hla蛋白以可溶形式表達,細胞裂解實驗表明,純化的Hla蛋白可以顯著裂解兔紅細胞,但人紅細胞和羊紅細胞對Hla殺傷作用不敏感。ELISA結果表明,獲得了效價較高的多克隆抗體。該抗體可以有效抑制Hla對兔紅細胞的裂解作用。結論 SAU的Hla蛋白對不同種屬紅細胞的溶解能力不同,為探討Hla裂解細胞的機制給予一定的提示;同時所制備的特異性抗體(anti-Hla)可以抑制Hla的溶血作用,為深入研究Hla的致病機制奠定了基礎。
[Abstract]:Objective to express 偽 -hemolysin (alpha hemolysin,Hla) of staphylococcus aureus by recombinant expression of 偽 -hemolysin (alpha hemolysin,Hla), an important exocrine of Staphylococcus aureus, and to detect the lytic effect of Hla protein on erythrocytes of different species. The specific antibody was prepared and the neutralization activity of the antibody was detected. Methods using the genome of SAU NCTC-8325 strain as template, the hla gene was amplified by PCR. The recombinant expression vector p ET-28a-Hla, was constructed and transformed into Escherichia coli BL21 (DE3). Hla protein was obtained by IPTG induced expression and purified by Ni2 column affinity. The hemolytic activity of Hla protein was determined by erythrocyte lysis test. Results Recombinant Hla protein was expressed in soluble form. Cell lysis assay showed that the purified Hla protein could significantly split rabbit erythrocytes, but human erythrocytes and sheep erythrocytes were not sensitive to the killing effect of Hla. A polyclonal antibody with high titer was obtained. The antibody can effectively inhibit the effect of Hla on rabbit erythrocyte lysis. Conclusion the Hla protein of SAU has different ability to dissolve erythrocytes in different species, which may be helpful for the study of the mechanism of Hla lysis cells. At the same time, the specific antibody (anti-Hla) can inhibit hemolysis of Hla, which lays a foundation for further study of the pathogenesis of Hla.
【作者單位】： 廣西醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院;軍事醫(yī)學科學院基礎醫(yī)學研究所;
【基金】：國家自然科學基金面上資助項目(31370170,31170074)
【分類號】：R378.11

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本文編號：2420651