【摘要】：目的構(gòu)建人Period2(Per2)基因shRNA慢病毒。方法設(shè)計并合成3對特異性人Per2基因shRNA靶序列,構(gòu)建到pENTRTM/U6(GV112)慢病毒載體中,包裝慢病毒,用real-time PCR篩選取最佳片段。對感染的U343細胞,經(jīng)嘌呤霉素初步篩選,Western blot鑒定Per2蛋白表達,得到Per2低表達的細胞。結(jié)果成功構(gòu)建了具有Per2沉默效應(yīng)的shRNA慢病毒。結(jié)論此次包裝的慢病毒可以成功抑制Per2基因在膠質(zhì)瘤U343細胞中的表達,并可用嘌呤霉素篩選低表達細胞株。
[Abstract]:Objective to construct human Period2 (Per2) gene shRNA lentivirus. Methods three pairs of specific shRNA target sequences of human Per2 gene were designed and synthesized and constructed into pENTRTM/U6 (GV112) lentivirus vector. The lentivirus was packaged and the best fragment was screened by real-time PCR. The expression of Per2 protein was identified by purine mycin (, Western blot) screening in infected U343 cells, and the cells with low Per2 expression were obtained. Results shRNA lentivirus with Per2 silencing effect was successfully constructed. Conclusion the packaged lentivirus can successfully inhibit the expression of Per2 gene in U343 glioma cells, and purine mycin can be used to screen low expression cell lines.
【作者單位】： 寧夏醫(yī)科大學(xué);寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院神經(jīng)外科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81160313)
【分類號】：R373;Q78

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本文編號：2415453