【摘要】：目的: 構(gòu)建含人腫瘤壞死因子相關(guān)調(diào)亡誘導(dǎo)配體(human TNF-Related Apoptosis Inducing Ligand,hTRAIL)和螢火蟲熒光素酶(firefly luciferase,LUC)的腺病毒載體,為用影像學(xué)方法在活體上間接監(jiān)測(cè)治療基因hTRAIL 的表達(dá)奠定基礎(chǔ)。 方法: 用Bgl II 和XbaI 酶切質(zhì)粒PDC-LUC 后,回收1700bp 大小LUC 的DNA 片段;用BamH I 和XbaI 酶切含內(nèi)核糖體進(jìn)入位點(diǎn)( interal ribosoe entry site, IRES)基因的質(zhì)粒Pclon5 后,回收其線性化片段。用T4 DNA 連接酶連接上述兩片段,LUC 基因就插入到Pclon5 的IRES 基因的下游,命名為Pclon5-LUC。Pclon5-LUC 用Kpn I 和Xba I 酶切鑒定。 將Pclon5-LUC 用Bgl II 和XbaI 酶切,回收IRES-LUC基因,與用BamHI/SpeI 酶切后線性化的Pclon9 連接,獲得含多克隆位點(diǎn)的Pclon9.5-LUC,先用EcoR I 與Age I 酶切鑒定,再用Sca I 酶切鑒定。 Pclon9.5-LUC 用EcoRI 和Xho I 酶切,回收含多克隆位點(diǎn)IRES-LUC基因片段。PDC312-CMV用EcoRI和Sal I酶切,回收線性化片段,將含多克隆位點(diǎn)的IRES-LUC 基因片段插入到PDC312-CMV 中兩個(gè)絕緣子中間, 即PDC312-CMV-9.5-LUC,用Pst I 酶切鑒定。 將PDC312-CMV-9.5-LUC 用EcoRI 和SalI 酶切,回收線性化片段;PDC-humanTRAIL 用EcoRI 和SalI 酶切,回
[Abstract]:Aim: to construct adenovirus vector containing human tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand (human TNF-Related Apoptosis Inducing Ligand,hTRAIL) and luciferase (firefly luciferase,LUC) of firefly. To provide a basis for indirect monitoring of therapeutic gene hTRAIL expression in vivo by imaging methods. Methods: after the plasmid PDC-LUC was digested with Bgl II and XbaI, the DNA fragment of the 1700bp size LUC was recovered, and the plasmid Pclon5 containing the internal ribosome entering the (interal ribosoe entry site, IRES) gene was digested with BamH I and XbaI, and the linearized fragment was recovered. The LUC gene was inserted into the downstream of the IRES gene of Pclon5 with T4 DNA ligase, and named Pclon5-LUC.Pclon5-LUC was digested by Kpn I and Xba I. Pclon5-LUC was digested with Bgl II and XbaI, and the IRES-LUC gene was recovered and ligated with the linearized Pclon9 digested by BamHI/SpeI. The Pclon9.5-LUC, containing polyclonal sites was identified by EcoR I and Age I restriction digestion, and then by Sca I restriction digestion. Pclon9.5-LUC was digested with EcoRI and Xho I, and polyclonal site IRES-LUC gene fragment was recovered. PDC312-CMV was digested with EcoRI and Sal I enzyme, and linear fragment was recovered. The IRES-LUC gene fragment containing polyclonal sites was inserted into the two insulators in PDC312-CMV, that is, PDC312-CMV-9.5-LUC, was identified by Pst I digestion. PDC312-CMV-9.5-LUC was digested with EcoRI and SalI, and linearized fragments were recovered. PDC-humanTRAIL was digested with EcoRI and SalI.
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號(hào)】：R346

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2408639