【摘要】：從未經(jīng)主動免疫的健康志愿者的外周血淋巴細(xì)胞中提取總RNA,用RT-PCR擴(kuò)增人抗體重鏈(VH)和輕鏈(VL)可變區(qū)基因,得到了6種VH家族基因,11種VL家族基因,這些抗體基因家族覆蓋了人抗體基因多樣性的95%以上。采用改進(jìn)的SOEPCR法將VH基因和VL基因連接成人單鏈抗體(scFv)基因,并克隆到噬菌粒載體pCANTAB5E中,將連接產(chǎn)物電轉(zhuǎn)化大腸桿菌TG1,經(jīng)輔助噬菌體M13KO7超感染,構(gòu)建了庫容為5.58×109的噬菌體單鏈抗體庫。采用BstNI酶切法證明,構(gòu)建的噬菌體單鏈抗體庫具有良好的多樣性。以TNF-α為靶,從該抗體庫中篩選到了抗TNF-α抗體,這說明該抗體庫可用于人源抗體的篩選。
[Abstract]:Total RNA, was extracted from peripheral blood lymphocytes of healthy volunteers who were not actively immunized. Human antibody heavy chain (VH) and light chain (VL) variable region genes were amplified by RT-PCR. Six VH family genes and 11 VL family genes were obtained. These antibody gene families cover more than 95% of the diversity of human antibody genes. The VH gene and the VL gene were linked to the adult single-chain antibody (scFv) gene by modified SOEPCR method, and cloned into the bacteriophage vector pCANTAB5E. The ligated product was electrotransformed into E. coli TG1, and superinfected by auxiliary phage M13KO7. A phage scFv library with a capacity of 5.58 脳 109 was constructed. BstNI digestion showed that the constructed phage scFv library had good diversity. Using TNF- 偽 as the target, the anti TNF- 偽 antibody was screened from the antibody library, which indicated that the antibody library could be used for the screening of human antibody.
【作者單位】： 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所 安徽醫(yī)科大學(xué)
【分類號】：R392.1;

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本文編號：2401351