【摘要】：目的 建立穩(wěn)定高效分離乳豬肝細(xì)胞與Kupffer細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)流程，研究乳豬肝細(xì)胞與Kupffer細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)對(duì)肝細(xì)胞的生長、代謝、解毒等生理功能的影響，為構(gòu)建高效、經(jīng)濟(jì)實(shí)用的人工肝系統(tǒng)提供參考數(shù)據(jù)。方法 采用Ⅳ型膠原酶離體灌注法分離單個(gè)乳豬肝細(xì)胞，聯(lián)合percoll液密度梯度離心法分離Kupffer細(xì)胞，比較肝細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)和以不同比例與Kupffer細(xì)胞共同培養(yǎng)時(shí)對(duì)安定和醋氨酚的清除功能和生存時(shí)間。結(jié)果 采用本方法每頭乳豬可分離得到單個(gè)肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞數(shù)為(3.5±1.1)×10~9，，活性大于90％±2％。Kupffer細(xì)胞的產(chǎn)量平均為(2.35±0.5)×10~8，純度為95％±4％。肝細(xì)胞與Kupffer細(xì)胞按12∶1比例混合時(shí)較8∶1和16∶1混合時(shí)，鏡下細(xì)胞形態(tài)學(xué)上生長更好，對(duì)安定和醋氨酚的清除顯著優(yōu)于后兩者，并且功能可維持兩周左右；而以16∶1及8∶1混合和肝細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)時(shí)，肝細(xì)胞雖能存活十天以上，但一周左右肝細(xì)胞功能就明顯減低。結(jié)論 1．通過本實(shí)驗(yàn)研究成功地建立了以離體肝灌注的Ⅳ型膠原酶消化分離乳豬肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞及聯(lián)合Percoll液密度梯度離心法分離Kupffer細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)室操作流程，該流程穩(wěn)定高效實(shí)用，分離得到的肝細(xì)胞及Kupffer細(xì)胞數(shù)量基本能滿足生物人工肝對(duì)肝細(xì)胞數(shù)量的要求，可用于構(gòu)建生物人工肝。2．按8∶1、12∶1和16∶1的比例在體外進(jìn)行肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞與Kupffer細(xì)胞264小時(shí)原代貼壁共同培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞和Kupffer細(xì)胞在適宜的培養(yǎng)條件下可進(jìn)行大量共培養(yǎng)；這兩種肝細(xì)胞的同步貼壁簡單共培養(yǎng)，肝細(xì)胞的生長、解毒及生理功能將受到影響，并且按12∶1比例混合培養(yǎng)時(shí)較8∶1和16∶1以及肝細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)生長及功能上為佳，細(xì)胞生物學(xué)活性也高，生長也較好，這些數(shù)據(jù)提示我們當(dāng)肝細(xì)胞和枯否細(xì)胞體外共培養(yǎng)時(shí)選擇合適的比例、時(shí)機(jī)和方法以及更適合的培養(yǎng)系統(tǒng)是需要的。我們發(fā)現(xiàn)12∶1比例生長及功能更好并可用于構(gòu)建生物人工肝。
[Abstract]:Objective to study the effects of co-culture of porcine hepatocytes and Kupffer cells on the growth, metabolism, detoxification and other physiological functions of porcine hepatocytes. Economical and practical artificial liver system provides reference data. Methods single porcine hepatocytes were isolated by type 鈪

本文編號(hào)：2401125