【摘要】：目的:應(yīng)用非復(fù)制腺病毒表達(dá)系統(tǒng)構(gòu)建表達(dá)人輪狀病毒非結(jié)構(gòu)蛋白4(NSP4)的重組腺病毒,初步評價(jià)其免疫保護(hù)效果。方法:構(gòu)建含野生輪狀病毒NSP4基因的穿梭質(zhì)粒pshuttle-NSP4,與腺病毒骨架質(zhì)粒pAdeasy經(jīng)同源重組后在Ad-293細(xì)胞中包裝獲得pAd-NSP4重組腺病毒顆粒。電鏡、RT-PCR、免疫熒光等方法鑒定病毒特征及在體外細(xì)胞中的表達(dá)。肌肉注射及滴鼻方式免疫小鼠,檢測小鼠血清抗體效價(jià)及其中和保護(hù)效果。結(jié)果:獲得了滴度為108.25CCID50/ml的重組腺病毒pAd-NSP4,免疫熒光檢測到特異性目的蛋白的表達(dá)。二次免疫后肌肉注射和滴鼻小鼠的ELISA血清平均效價(jià)分別為1∶320和1∶1436.8;中和抗體效價(jià)1∶45.3和1∶71.8。結(jié)論:表達(dá)輪狀病毒NSP4蛋白的非復(fù)制型重組腺病毒顆粒具有良好的免疫原性。滴鼻途徑比肌肉注射可更加有效地誘導(dǎo)小鼠的免疫應(yīng)答。
[Abstract]:Aim: to construct a recombinant adenovirus expressing human rotavirus nonstructural protein 4 (NSP4) by non replicating adenovirus expression system and evaluate its immunological protective effect. Methods: the shuttle plasmid pshuttle-NSP4, containing wild rotavirus NSP4 gene and adenovirus skeleton plasmid pAdeasy were constructed and packaged in Ad-293 cells to obtain pAd-NSP4 recombinant adenovirus particles after homologous recombination. Electron microscope, RT-PCR, immunofluorescence and other methods were used to identify the characteristics of the virus and its expression in vitro. Mice were immunized by intramuscular injection and nasal drip. Results: the recombinant adenovirus pAd-NSP4, with titer of 108.25CCID50/ml was obtained and the expression of specific target protein was detected by immunofluorescence. The average titers of ELISA were 1: 320 and 1: 1436.8, respectively, and the neutralizing antibody titers were 1: 45.3 and 1: 71.8, respectively. Conclusion: the non-replicating recombinant adenovirus granules expressing rotavirus NSP4 protein have good immunogenicity. Nasal drip is more effective than intramuscular injection in inducing immune response in mice.
【作者單位】： 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院/北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所
【基金】：國家科技重大專項(xiàng)資助項(xiàng)目(20132X10004002-003-05)
【分類號】：R373

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 王大燕;王健偉;王彥斌;魏強(qiáng);屈建國;洪濤;;輪狀病毒NSP4基因在非復(fù)制型腺病毒載體中的表達(dá)及免疫活性[J];世界華人消化雜志;2006年09期

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 黃敏;黃英;;輪狀病毒腹瀉研究進(jìn)展[J];華西醫(yī)學(xué);2014年04期

2 曹志亮;陳元鼎;;輪狀病毒腸毒素NSP4:一個(gè)多功能糖蛋白[J];生物技術(shù)通訊;2006年05期

3 郜巖;孫茂盛;;腺病毒載體的研究進(jìn)展及其在輪狀病毒疫苗研究中的應(yīng)用[J];中國生物制品學(xué)雜志;2012年03期

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1 張榮;基于反向遺傳平臺的套式病毒蛋白結(jié)構(gòu)與功能研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2013年

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1 雷燕;大熊貓輪狀病毒CH-1株基因克隆及分子解析[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

2 甄雙平;昆明地區(qū)2002～2004年輪狀病毒性腸炎分子基因特征研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2006年

3 曾艷;豬輪狀病毒NSP4基因原核與真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其表達(dá)研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

4 趙高偉;豬輪狀病毒DN30209株的馴化培養(yǎng)[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

5 李松;一株人源性輪狀病毒的分離及其在Vero細(xì)胞上的適應(yīng)性培養(yǎng)[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

6 曹穎;人滅活輪狀病毒疫苗誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物免疫應(yīng)答研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2013年

7 李楊;輪狀病毒與腸道病毒71型的重組嵌合基因工程疫苗初步研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2013年

8 胡婷婷;2011-2012年廣州市哨點(diǎn)醫(yī)院病毒性腹瀉的流行病學(xué)研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

9 胡長霞;益生菌對輪狀病毒性腹瀉小鼠腸道屏障的影響及機(jī)制的探討[D];華中科技大學(xué);2013年

【二級參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 王大燕,王健偉,魏強(qiáng),屈建國,于修平,洪濤;人輪狀病毒NSP4蛋白的表達(dá)及其致小鼠腹瀉作用的初步研究[J];中國病毒學(xué);2003年03期

【相似文獻(xiàn)】

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1 劉馨;張光明;李鴻釗;謝天宏;孫茂盛;;表達(dá)輪狀病毒VP4抗原的重組腺病毒對新生小鼠的被動(dòng)免疫保護(hù)作用[J];中國生物制品學(xué)雜志;2007年01期

2 高佃平;;應(yīng)用pAdEasy-1系統(tǒng)構(gòu)建表達(dá)狂犬病毒核蛋白的重組腺病毒[J];中國人獸共患病學(xué)報(bào);2006年02期

3 曹漢威;張春紅;黃忠;阮良基;林潔;;表達(dá)豬生長激素基因的重組腺病毒的構(gòu)建及對豬生長的促進(jìn)效果觀察[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào);2006年06期

4 陳平;楊玲麟;胡火珍;;SLC基因重組腺病毒的構(gòu)建[J];四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2007年03期

5 于新友;沈志強(qiáng);管宇;南松劍;王金良;肖躍強(qiáng);唐娜;;PRRSV HN25株ORF5基因的克隆和重組腺病毒的構(gòu)建[J];畜牧與獸醫(yī);2010年01期

6 耿合員;孫元;韓宗璽;邵昱昊;仇華吉;孔憲剛;劉勝旺;;表達(dá)雞傳染性支氣管炎病毒S1基因重組腺病毒的構(gòu)建[J];中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2011年03期

7 陳平;黃李雅;袁耀宗;;大鼠活化STAT蛋白抑制劑1基因重組腺病毒質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定[J];中國生物制品學(xué)雜志;2011年04期

8 尹新華,張莉,于維漢;野生型p53基因轉(zhuǎn)移對體外培養(yǎng)的血管平滑肌細(xì)胞增殖的抑制作用及其機(jī)制的研究[J];中國地方病學(xué)雜志;1998年05期

9 宋長緒,蔣智勇,王貴平,高向陽,趙亞華;豬圓環(huán)病毒2型GD株ORF2基因重組腺病毒的構(gòu)建及其表達(dá)[J];中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2005年05期

10 張芳琳;劉勇;于瀾;胡剛;吳興安;史夢遠(yuǎn);白文濤;王海濤;徐志凱;;漢灘病毒G1S0.7嵌合基因重組腺病毒的構(gòu)建及鑒定[J];免疫學(xué)雜志;2006年02期

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1 劉耘;趙明;;人鈉碘同向轉(zhuǎn)運(yùn)體的腺病毒重組[A];第四屆全國中青年核醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2008年

2 張雪;鄔開朗;樂鑫;朱應(yīng);吳建國;;重組腺病毒表達(dá)siRNA抑制SARS病毒基因的研究[A];第二屆中國青年學(xué)者微生物遺傳學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2006年

3 李凡;魏強(qiáng);趙春燕;陳立;;腺病毒載體介導(dǎo)的HSV-tk基因殺傷腫瘤細(xì)胞的研究[A];新世紀(jì) 新機(jī)遇 新挑戰(zhàn)——知識創(chuàng)新和高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)發(fā)展（上冊）[C];2001年

4 李勇;李偉榮;王健偉;王敏;何金生;于修平;洪濤;;表達(dá)輪狀病毒VP6抗原重組腺病毒的免疫學(xué)效果研究[A];第6次全國微生物學(xué)與免疫學(xué)大會(huì)論文摘要匯編[C];2004年

5 何金生;王健偉;姜秀麗;王大燕;溫樂英;董京芳;屈建國;洪濤;;人輪狀病毒非復(fù)制型重組腺病毒粘膜免疫效果的研究[A];中國免疫學(xué)會(huì)第四屆學(xué)術(shù)大會(huì)會(huì)議議程及論文摘要集[C];2002年

6 吳興安;于瀾;胡剛;張芳琳;白文濤;史夢遠(yuǎn);王海濤;劉勇;徐志凱;;漢灘病毒G2重組腺病毒的表達(dá)及其免疫學(xué)特性研究[A];第6次全國微生物學(xué)與免疫學(xué)大會(huì)論文摘要匯編[C];2004年

7 祝衛(wèi)國;宋長緒;王貴平;楊增歧;王旭榮;黃忠;張春紅;;豬Ⅱ型圓環(huán)病毒ORF1、ORF2基因串聯(lián)重組腺病毒的構(gòu)建[A];第一屆中國養(yǎng)豬生產(chǎn)和疾病控制技術(shù)大會(huì)——2005中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2005年

8 杜以軍;姜平;楊曉瑋;湯景元;李玉峰;李永東;;豬口蹄疫病毒多抗原表位重組腺病毒的構(gòu)建與鑒定[A];第六屆全國會(huì)員代表大學(xué)暨第11次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（上）[C];2005年

9 周林福;朱毅;殷凱生;朱自路;;編碼N端截短的IκBα突變體重組腺病毒的構(gòu)建與鑒定[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第五次全國哮喘學(xué)術(shù)會(huì)議暨中國哮喘聯(lián)盟第一次大會(huì)論文匯編[C];2006年

10 魯俊鵬;田新貴;羅滿林;李海濤;周志超;周榮;;B型流感病毒B/Guangzhou/01/2007株HA基因重組3型腺病毒的構(gòu)建[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第七屆全國會(huì)員代表大會(huì)暨第十三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（下冊）[C];2009年

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1 王雪飛;諾瓦克病毒陌生的“熟臉兒”[N];健康報(bào);2006年

2 記者 李玉成;志在與世界比肩[N];科技日報(bào);2001年

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1 王敏;基因優(yōu)化的表達(dá)人輪狀病毒重組腺病毒免疫效果研究[D];中國疾病預(yù)防控制中心;2008年

2 劉勇;輪狀病毒VP7基因修飾、表達(dá)及免疫原性研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2000年

3 劉志華;用腺病毒載體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移研究HBV/C區(qū)熱點(diǎn)變異對小鼠免疫應(yīng)答的影響[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2002年

4 梁蔚芳;聚乙二醇化干擾素α-2a與干擾素α-2a在體內(nèi)和體外的抗乙型肝炎病毒活性研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2007年

5 劉馨;重組輪狀病毒VP4抗原的表達(dá)及免疫原性研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2005年

6 周業(yè)飛;豬繁殖與呼吸綜合征病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NSP1、NSP2和NSP4免疫抑制研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

7 李衛(wèi)華;表達(dá)HCV-NS3抗原的重組腺病毒載體疫苗的實(shí)驗(yàn)研究[D];四川大學(xué);2005年

8 馬樹東;Her-2/neu膜外及跨膜區(qū)蛋白基因重組腺病毒的構(gòu)建和誘導(dǎo)的免疫效應(yīng)[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2004年

9 羅保君;漢灘病毒重組腺病毒疫苗的基礎(chǔ)研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2004年

10 張艷麗;人FL的甲醇酵母表達(dá)及腺病毒介導(dǎo)的免疫基因治療[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2004年

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1 李玉峰;豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）病毒GP5蛋白重組腺病毒的構(gòu)建與鑒定[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

2 李凱;聯(lián)合應(yīng)用抗原遞呈分子基因的漢坦病毒嵌合基因重組腺病毒的構(gòu)建及表達(dá)產(chǎn)物鑒定[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

3 湯景元;豬繁殖與呼吸綜合征病毒M蛋白重組腺病毒的構(gòu)建與免疫特性研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

4 徐琳;炭疽桿菌保護(hù)性抗原重組腺病毒疫苗的構(gòu)建及氣溶膠免疫探索性研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2006年

5 謝磊;豬瘟病毒主要抗原基因與豬IL2重組腺病毒的構(gòu)建及鑒定[D];中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所;2006年

6 田博;規(guī)模化懸浮培養(yǎng)哺乳動(dòng)物細(xì)胞生產(chǎn)腺病毒工藝的實(shí)驗(yàn)研究[D];山東師范大學(xué);2007年

7 孫普;A型口蹄疫病毒多基因重組腺病毒載體的構(gòu)建[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

8 陳超;豬肺炎支原體P97 C末端基因重組腺病毒的構(gòu)建及其免疫效果的評價(jià)[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2009年

9 蘇永良;力生長因子、E肽重組腺病毒的構(gòu)建及其在神經(jīng)細(xì)胞中的表達(dá)[D];西南大學(xué);2013年

10 邱銀榮;輪狀病毒感染膽管上皮細(xì)胞對HMGB1表達(dá)及釋放的影響[D];華中科技大學(xué);2011年

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本文編號：2390664