【摘要】： 干擾素具有廣泛的生物學功能，如抗病毒、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、調(diào)控細胞增殖和分化等。IFN-α作為Ⅰ型干擾素家族的重要成員，主要產(chǎn)生于非免疫細胞，其功能的多樣性是通過誘導細胞表達多種蛋白質(zhì)而實現(xiàn)的。IFN-α作用于細胞可啟動一條或多條不同的信號轉(zhuǎn)導途徑，不同的信號途徑又可轉(zhuǎn)錄出不同的IFN刺激基因。針對其調(diào)節(jié)非免疫細胞發(fā)動特定效應抵抗病毒的特點，探索非免疫細胞對IFN-α刺激反應的機理，和由此機理所導致的各種可能的生物學意義具有很大的意義。 本論文涉及IFN-α刺激人成纖維細胞KMB-17株的所引起的細胞內(nèi)基因表達的變化，通過IFN-α刺激人二倍體細胞KMB-17后的基因反應的差異分析，成功克隆到兩個差異基因，，其中IFN-α刺激特異表達得蛋白分子為類CD69Ⅱ型膜蛋白(typeⅡmembrane protein similar to CD69，TⅡMPSC)TⅡMPSC，長度為697bp的cDNA基因(基因庫號碼：AB015628)；另一個差異蛋白為IFN-α刺激下調(diào)表達蛋白，cds長度為593bp(基因庫號碼：NM_001026)，經(jīng)對比分析確定為核糖體復合物亞單位蛋白S24變異體2(ribosomal protein S24 transcript variant 2，S24v2)。我們分別將基因克隆到融合表達載體pET-28a和pGEX-5x-1，構(gòu)建了pET-TⅡMPSC和pGEX-S24v2表達質(zhì)粒，表達純化獲得較高純度的目的蛋白，用該蛋白免疫小鼠后制備的特異抗體，蛋白印跡實驗表明原核表達的的蛋白能被該抗體特異識別。 對TⅡMPSCcDNA編碼蛋白的分析表明，該蛋白具有膜蛋白特性，這一點為該蛋白在人成纖維細胞包膜的免疫熒光亞細胞定位所證實。細胞增殖實驗和JAK／STAT信號通路相關(guān)研究結(jié)果提示IFN-α刺激細胞后上調(diào)表達的TⅡMPSC蛋白能夠明顯推進人成纖維細胞進入S期，其在JAK／STAT信號通路中所處的位置和功能分析提供了一定的線索：免疫共沉淀實驗實驗顯示了TⅡMPSC蛋白通過JAK／STAT信號傳導介導的信號轉(zhuǎn)導和轉(zhuǎn)錄激活。 S24v2作為胞內(nèi)核糖體復合物的亞單位之一正常情況下參與了核糖體構(gòu)成和蛋白翻譯的過程，IFN-α的刺激能夠特異阻滯該蛋白的表達，在轉(zhuǎn)染pcDNA-S24v2的經(jīng)IFN-α預處理的KMB-17細胞中，脊髓灰質(zhì)炎Ⅰ型病毒(Polio virus，typeⅠ)的增殖得到了補償。通過檢測在轉(zhuǎn)染pcDNA-S24v2的KMB-17細胞中的病毒滴度，下調(diào)或干擾S24v2的表達可能延遲病毒蛋白的合成，從而影響其復制，可以推測S24v2對于病毒復制及病毒蛋白的合成均具有重要作用。
[Abstract]:Interferon has a wide range of biological functions, such as anti-virus, anti-tumor, immunomodulation, regulating cell proliferation and differentiation, etc. As an important member of interferon type I family, IFN- 偽 is mainly produced in non-immune cells. Its function diversity is realized by inducing cells to express many kinds of proteins. IFN- 偽 can activate one or more different signal transduction pathways, and different signal pathways can transcribe different IFN stimulating genes. In view of its characteristics of regulating non-immune cells to initiate specific effects against virus, it is of great significance to explore the mechanism of non-immune cells' response to IFN- 偽 stimulation and the possible biological significance resulting from this mechanism. This paper deals with the changes of gene expression induced by IFN- 偽 stimulation of human fibroblast KMB-17 strain. Two differentially expressed genes were successfully cloned by differential analysis of the gene response of IFN- 偽 to human diploid cell KMB-17. Among them, IFN- 偽 stimulated the specific expression of CD69 鈪

本文編號：2390544