【摘要】：目的:篩選特異性抑制人-單核巨噬細(xì)胞TLR2基因表達(dá)的siRNA(small interference RNA)序列,在分子水平上初步討論其在HIV治療方面的前景。方法:在基因庫(kù)中尋找TLR2基因的mRNA序列,針對(duì)TLR2基因設(shè)計(jì)并合成3條siRNA,陽(yáng)性對(duì)照為人類(lèi)看家基因GAPDH siRNA,陰性對(duì)照為6-羧基熒光素標(biāo)記的siRNA(NC-FAM)。采集健康人新鮮外周血,分離單個(gè)核細(xì)胞,再經(jīng)貼壁法培養(yǎng)純化為人-單核巨噬細(xì)胞。采用陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑Lipofectamine 2000介導(dǎo)轉(zhuǎn)染培養(yǎng)的人-單核巨噬細(xì)胞。用q-PCR法測(cè)定干擾后單核巨噬細(xì)胞的TLR2 mRNA的表達(dá),Western blot法測(cè)定干擾后TLR2蛋白表達(dá)。結(jié)果:轉(zhuǎn)染72 h后,陽(yáng)性對(duì)照組GAPDH mRNA及蛋白的表達(dá)明顯降低(P0.05)。siRNAs組TLR2 mRNA表達(dá)水平整體有顯著性差異(F=41.957,P0.001),與陰性對(duì)照組比較,TLR2 siRNA各組的TLR2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平均明顯降低(P0.05),抑制率分別為46%、43%、43%。WB結(jié)果顯示,TLR2 siRNA各組的TLR2蛋白表達(dá)量顯著降低(P0.05)。結(jié)論:本研究設(shè)計(jì)的siRNA能夠有效抑制人-單核巨噬細(xì)胞TLR2基因的表達(dá),從分子免疫學(xué)角度出發(fā),表明通過(guò)阻斷siRNA介導(dǎo)的TLR2信號(hào)傳導(dǎo)通路能夠?yàn)镠IV治療提供新思路。
[Abstract]:Aim: to screen the siRNA (small interference RNA) sequence that specifically inhibits the expression of TLR2 gene in human mononuclear macrophages, and to discuss its prospect in the treatment of HIV at molecular level. Methods: the mRNA sequence of TLR2 gene was searched in the gene bank. Three siRNA, positive controls were designed and synthesized for TLR2 gene. The siRNA (NC-FAM) labeled with 6-carboxyl fluorescein was used as the GAPDH siRNA, negative control of human housekeeping gene. Mononuclear cells were isolated from fresh peripheral blood of healthy people and purified from human mononuclear macrophages by adherent method. Human mononuclear macrophages were transfected with cationic liposome reagent Lipofectamine 2000. The expression of TLR2 mRNA in mononuclear macrophages after interference was determined by q-PCR method. The expression of TLR2 protein was detected by, Western blot method. Results: after 72 hours of transfection, the expression of GAPDH mRNA and protein in the positive control group was significantly lower than that in the negative control group (P0.05). There was a significant difference in the TLR2 mRNA expression level between the). SiRNAs group and the negative control group. The relative expression level of TLR2 mRNA in TLR2 siRNA group was significantly decreased (P0.05), and the inhibition rate was 46% and 43kW respectively. The results showed that the expression of TLR2 protein in TLR2 siRNA group was significantly decreased (P0.05). Conclusion: the designed siRNA can effectively inhibit the expression of TLR2 gene in human mononuclear macrophages. From the point of view of molecular immunology, it is suggested that blocking the TLR2 signal transduction pathway mediated by siRNA can provide a new idea for HIV therapy.
【作者單位】： 廣西艾滋病防治研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 廣西醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院;廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院老年消化內(nèi)科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31360033) 廣西教育廳高�？蒲兄攸c(diǎn)資助項(xiàng)目(2013ZD012)資助
【分類(lèi)號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：2382944