長(zhǎng)波長(zhǎng)單色光誘導(dǎo)豚鼠近視模型的建立及視網(wǎng)膜視蛋白表達(dá)研究
發(fā)布時(shí)間:2018-12-12 09:56
【摘要】: 近視眼是最常見的眼科疾病之一,它在人群中尤其是青少年中的發(fā)病率有逐漸增高的趨勢(shì)。一些病例性近視眼常合并有青光眼、白內(nèi)障、玻璃體病變、視網(wǎng)膜變性和/或脫離、后極部葡萄腫以及弱視等并發(fā)癥,嚴(yán)重危害視覺健康。研究近視眼的發(fā)生和發(fā)展是全球公共衛(wèi)生工作和防盲治盲工作的重點(diǎn)之一。近年來,近視眼發(fā)病機(jī)制的的研究取得了重大突破,確立了兩種實(shí)驗(yàn)性近視眼的模型—形覺剝奪性近視和光學(xué)離焦性近視,雖取得一定成果,,但近視眼形成機(jī)制仍不完全清楚,不能很好指導(dǎo)近視眼的防治。屈光狀態(tài)的發(fā)育依賴視覺,只有干擾正常的視覺環(huán)境才能引起近視。視覺包括光覺、形覺和色覺三部分,形覺剝奪性近視可認(rèn)為是影響了光覺,光學(xué)離焦性近視可認(rèn)為是干擾了形覺,色覺是視覺體驗(yàn)重要的組成部分,在辨別和感知物體特性中有極其重要的作用,它應(yīng)該在近視眼發(fā)病機(jī)制中具有一定的作用。目前國(guó)內(nèi)外還沒有相關(guān)研究,本課題圍繞色覺與近視眼之間的關(guān)系,研究色覺在近視眼中的作用以及其可能的作用機(jī)制。 第一部分長(zhǎng)波長(zhǎng)單色光誘導(dǎo)豚鼠近視眼動(dòng)物模型的建立 目的:研究與兩種視錐細(xì)胞吸收光譜波峰值相同波長(zhǎng)(長(zhǎng)波長(zhǎng)530nm、短波長(zhǎng)400nm)的單色光對(duì)豚鼠眼球屈光系統(tǒng)發(fā)育的影響,建立一種新的近視眼動(dòng)物模型,探討色覺與近視眼之間的關(guān)系。 方法:60只出生3天豚鼠隨機(jī)分為綠光(530nm)照射組、紫光(400nm)照射組、戴—1.5D鏡片(補(bǔ)償色像差)紫光照射組、戴0D鏡片紫光照射組、弱光照射組、強(qiáng)光照射組6組(n=10),分別在處理后2周、4周、6周、8周測(cè)量各組屈光度、眼軸長(zhǎng)度、玻璃體腔深度,并進(jìn)行對(duì)比比較,統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果:1、紫光照射組與戴—1.5D鏡片紫光照射組及戴0D鏡片紫光照射組屈光度之間在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)和總體相互比較均無明顯差別(F=2.152,P=0.1786);弱光照射組強(qiáng)光照射組之間在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)和總體相互比較也無明顯差別(F=2.606,P=0.1817)。2、綠光照射組與弱光照射組除干預(yù)前以外其余時(shí)間點(diǎn)屈光度均有明顯差異,明顯向近視發(fā)展(P<0.01);紫光照射組與弱光照射組第6周時(shí)出現(xiàn)顯著差異,第8周達(dá)到高峰,保持遠(yuǎn)視狀態(tài)(P<0.01)。3、綠光照射組與弱光照射組眼軸長(zhǎng)度在第4周以后有明顯差異(P<0.01);綠光照射組與弱光照射組玻璃體腔深度在第2周時(shí)有明顯差異(P<0.01),隨后差別逐漸增大。 結(jié)論:1、長(zhǎng)波長(zhǎng)單色光引起豚鼠明顯近視,并伴隨眼軸延長(zhǎng),玻璃體腔深度增加;去除了空間限制、形覺剝奪和光學(xué)離焦因素,成功建立了一種新的近視眼動(dòng)物模型,因與色覺關(guān)系密切,所以稱之為色覺失衡性近視眼動(dòng)物模型。2、色覺失衡性近視的形成可能與長(zhǎng)波長(zhǎng)與短波長(zhǎng)敏感視錐細(xì)胞信號(hào)對(duì)比有關(guān)。 第二部分長(zhǎng)波長(zhǎng)單色光誘導(dǎo)豚鼠近視眼中的視蛋白表達(dá)變化 目的:研究長(zhǎng)波長(zhǎng)單色光誘導(dǎo)豚鼠近視眼中視蛋白表達(dá)變化,探討視蛋白表達(dá)與單色光誘導(dǎo)豚鼠近視眼之間的關(guān)系。 方法:60只出生3天豚鼠隨機(jī)分為4組,分別置于綠光(530nm)、紫光(400nm)、弱光(2.2mmol/m~2/秒)、強(qiáng)光(5.6mmol/m~2/秒)照射8周,各組于上午10—12點(diǎn)鐘取材,通過電鏡觀察光感受器細(xì)胞的亞微結(jié)構(gòu)改變,視網(wǎng)膜平鋪片免疫細(xì)胞化學(xué)觀察視錐細(xì)胞數(shù)量變化,實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time PCR)觀察視蛋白mRNA的變化,Western-blot觀察視蛋白的變化,并進(jìn)行對(duì)比比較,統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果:1、綠光照射組背側(cè)與紫光照射組背側(cè)視網(wǎng)膜相比,光感受器細(xì)胞外突長(zhǎng)度減少,外節(jié)膜盤部分空泡化,內(nèi)節(jié)線粒體豐富,光感受器細(xì)胞核大;綠光照射組腹側(cè)與紫光照射組腹側(cè)相比,光感受器細(xì)胞外突長(zhǎng)度增加,外節(jié)膜盤完整,內(nèi)節(jié)線粒體稀疏,光感受器細(xì)胞核小。2、視網(wǎng)膜背側(cè)綠光照射組長(zhǎng)波長(zhǎng)敏感視錐細(xì)胞密度明顯增多,紫光照射組長(zhǎng)波長(zhǎng)敏感視錐細(xì)胞密度明顯減少,強(qiáng)、弱光照射組之間無明顯區(qū)別;視網(wǎng)膜腹側(cè)短波長(zhǎng)敏感視錐細(xì)胞熒光染色顯示各組間無顯著區(qū)別;綠光照射組共表達(dá)視錐細(xì)胞密度明顯增多,紫光照射組共表達(dá)視錐細(xì)胞密度明顯減少,強(qiáng)、弱光照射組之間無明顯區(qū)別。3、各組之間短波長(zhǎng)敏感視蛋白mRNA的表達(dá)無明顯差異(F=3.61,P=0.0649);長(zhǎng)波長(zhǎng)敏感視蛋白mRNA的表達(dá)弱光照射組和強(qiáng)光照射組之間無顯著區(qū)別(P>0.05);綠光照射組比弱光照射組長(zhǎng)波長(zhǎng)敏感視蛋白mRNA表達(dá)明顯增多(P<0.01);紫光照射組比弱光照射組長(zhǎng)波長(zhǎng)敏感視蛋白mRNA表達(dá)明顯減少(P<0.05)。4、各組之間短波長(zhǎng)敏感視蛋白的表達(dá)無明顯差異(F=3.34,P=0.0764);長(zhǎng)波長(zhǎng)敏感視蛋白的表達(dá)弱光照射組和強(qiáng)光照射組之間無顯著區(qū)別(P>0.05);綠光照射組比弱光照射組長(zhǎng)波長(zhǎng)敏感視蛋白表達(dá)明顯增多(P<0.05);紫光照射組比弱光照射組長(zhǎng)波長(zhǎng)敏感視蛋白mRNA表達(dá)明顯減少(P<0.01)。 結(jié)論:1、綠光(530nm)照射組背側(cè)和紫光(400nm)照射組腹側(cè)光感受器新陳代謝加強(qiáng)。2、長(zhǎng)波長(zhǎng)單色光誘導(dǎo)豚鼠近視眼長(zhǎng)波長(zhǎng)敏感視錐細(xì)胞明顯增多,長(zhǎng)波長(zhǎng)敏感視蛋白表達(dá)升高,這可能是光感受器細(xì)胞對(duì)單色光照射環(huán)境的一種代償性反應(yīng)。3、視蛋白表達(dá)可能參入了長(zhǎng)波長(zhǎng)單色光誘導(dǎo)豚鼠近視眼的形成。 第三部分形覺剝奪和光學(xué)離焦性豚鼠近視眼的視蛋白的表達(dá)變化 目的:研究形覺剝奪和光學(xué)離焦性豚鼠近視眼視蛋白的表達(dá)變化,探討視蛋白表達(dá)與試驗(yàn)性近視眼之間的關(guān)系。 方法:20只豚鼠隨機(jī)分為形覺剝奪組和光學(xué)離焦組(n=10),形覺剝奪組豚鼠出生3天后單眼2周戴半透明(半透明薄膜貼于平鏡表面)RGP鏡片,光學(xué)離焦組豚鼠出生3天后單眼戴-4DRGP鏡片,另一眼為對(duì)照組。2周后各組分別測(cè)量屈光度、眼軸長(zhǎng)度、玻璃體腔深度,并于上午10—12點(diǎn)鐘取材,實(shí)時(shí)熒光定量PCR觀察視蛋白mRNA的變化,Western-blot觀察視蛋白的變化,進(jìn)行對(duì)比比較,統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果:形覺剝奪組和光學(xué)離焦組相對(duì)于對(duì)照組短波長(zhǎng)敏感視蛋白及長(zhǎng)波長(zhǎng)敏感視蛋白表達(dá)均增加(P<0.01)。 結(jié)論:1、視蛋白表達(dá)可能在試驗(yàn)性豚鼠近視眼的形成中有重要作用。2、視錐細(xì)胞可能是感受形覺剝奪和光學(xué)離焦信息的部位。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】:復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:博士
【學(xué)位授予年份】:2007
【分類號(hào)】:R778.11;R-332
本文編號(hào):2374364
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】:復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:博士
【學(xué)位授予年份】:2007
【分類號(hào)】:R778.11;R-332
【引證文獻(xiàn)】
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本文編號(hào):2374364
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