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長波長單色光誘導(dǎo)豚鼠近視模型的建立及視網(wǎng)膜視蛋白表達研究

發(fā)布時間:2018-12-12 09:56
【摘要】: 近視眼是最常見的眼科疾病之一,它在人群中尤其是青少年中的發(fā)病率有逐漸增高的趨勢。一些病例性近視眼常合并有青光眼、白內(nèi)障、玻璃體病變、視網(wǎng)膜變性和/或脫離、后極部葡萄腫以及弱視等并發(fā)癥,嚴重危害視覺健康。研究近視眼的發(fā)生和發(fā)展是全球公共衛(wèi)生工作和防盲治盲工作的重點之一。近年來,近視眼發(fā)病機制的的研究取得了重大突破,確立了兩種實驗性近視眼的模型—形覺剝奪性近視和光學(xué)離焦性近視,雖取得一定成果,,但近視眼形成機制仍不完全清楚,不能很好指導(dǎo)近視眼的防治。屈光狀態(tài)的發(fā)育依賴視覺,只有干擾正常的視覺環(huán)境才能引起近視。視覺包括光覺、形覺和色覺三部分,形覺剝奪性近視可認為是影響了光覺,光學(xué)離焦性近視可認為是干擾了形覺,色覺是視覺體驗重要的組成部分,在辨別和感知物體特性中有極其重要的作用,它應(yīng)該在近視眼發(fā)病機制中具有一定的作用。目前國內(nèi)外還沒有相關(guān)研究,本課題圍繞色覺與近視眼之間的關(guān)系,研究色覺在近視眼中的作用以及其可能的作用機制。 第一部分長波長單色光誘導(dǎo)豚鼠近視眼動物模型的建立 目的:研究與兩種視錐細胞吸收光譜波峰值相同波長(長波長530nm、短波長400nm)的單色光對豚鼠眼球屈光系統(tǒng)發(fā)育的影響,建立一種新的近視眼動物模型,探討色覺與近視眼之間的關(guān)系。 方法:60只出生3天豚鼠隨機分為綠光(530nm)照射組、紫光(400nm)照射組、戴—1.5D鏡片(補償色像差)紫光照射組、戴0D鏡片紫光照射組、弱光照射組、強光照射組6組(n=10),分別在處理后2周、4周、6周、8周測量各組屈光度、眼軸長度、玻璃體腔深度,并進行對比比較,統(tǒng)計分析。 結(jié)果:1、紫光照射組與戴—1.5D鏡片紫光照射組及戴0D鏡片紫光照射組屈光度之間在各個時間點和總體相互比較均無明顯差別(F=2.152,P=0.1786);弱光照射組強光照射組之間在各個時間點和總體相互比較也無明顯差別(F=2.606,P=0.1817)。2、綠光照射組與弱光照射組除干預(yù)前以外其余時間點屈光度均有明顯差異,明顯向近視發(fā)展(P<0.01);紫光照射組與弱光照射組第6周時出現(xiàn)顯著差異,第8周達到高峰,保持遠視狀態(tài)(P<0.01)。3、綠光照射組與弱光照射組眼軸長度在第4周以后有明顯差異(P<0.01);綠光照射組與弱光照射組玻璃體腔深度在第2周時有明顯差異(P<0.01),隨后差別逐漸增大。 結(jié)論:1、長波長單色光引起豚鼠明顯近視,并伴隨眼軸延長,玻璃體腔深度增加;去除了空間限制、形覺剝奪和光學(xué)離焦因素,成功建立了一種新的近視眼動物模型,因與色覺關(guān)系密切,所以稱之為色覺失衡性近視眼動物模型。2、色覺失衡性近視的形成可能與長波長與短波長敏感視錐細胞信號對比有關(guān)。 第二部分長波長單色光誘導(dǎo)豚鼠近視眼中的視蛋白表達變化 目的:研究長波長單色光誘導(dǎo)豚鼠近視眼中視蛋白表達變化,探討視蛋白表達與單色光誘導(dǎo)豚鼠近視眼之間的關(guān)系。 方法:60只出生3天豚鼠隨機分為4組,分別置于綠光(530nm)、紫光(400nm)、弱光(2.2mmol/m~2/秒)、強光(5.6mmol/m~2/秒)照射8周,各組于上午10—12點鐘取材,通過電鏡觀察光感受器細胞的亞微結(jié)構(gòu)改變,視網(wǎng)膜平鋪片免疫細胞化學(xué)觀察視錐細胞數(shù)量變化,實時熒光定量PCR(Real-time PCR)觀察視蛋白mRNA的變化,Western-blot觀察視蛋白的變化,并進行對比比較,統(tǒng)計分析。 結(jié)果:1、綠光照射組背側(cè)與紫光照射組背側(cè)視網(wǎng)膜相比,光感受器細胞外突長度減少,外節(jié)膜盤部分空泡化,內(nèi)節(jié)線粒體豐富,光感受器細胞核大;綠光照射組腹側(cè)與紫光照射組腹側(cè)相比,光感受器細胞外突長度增加,外節(jié)膜盤完整,內(nèi)節(jié)線粒體稀疏,光感受器細胞核小。2、視網(wǎng)膜背側(cè)綠光照射組長波長敏感視錐細胞密度明顯增多,紫光照射組長波長敏感視錐細胞密度明顯減少,強、弱光照射組之間無明顯區(qū)別;視網(wǎng)膜腹側(cè)短波長敏感視錐細胞熒光染色顯示各組間無顯著區(qū)別;綠光照射組共表達視錐細胞密度明顯增多,紫光照射組共表達視錐細胞密度明顯減少,強、弱光照射組之間無明顯區(qū)別。3、各組之間短波長敏感視蛋白mRNA的表達無明顯差異(F=3.61,P=0.0649);長波長敏感視蛋白mRNA的表達弱光照射組和強光照射組之間無顯著區(qū)別(P>0.05);綠光照射組比弱光照射組長波長敏感視蛋白mRNA表達明顯增多(P<0.01);紫光照射組比弱光照射組長波長敏感視蛋白mRNA表達明顯減少(P<0.05)。4、各組之間短波長敏感視蛋白的表達無明顯差異(F=3.34,P=0.0764);長波長敏感視蛋白的表達弱光照射組和強光照射組之間無顯著區(qū)別(P>0.05);綠光照射組比弱光照射組長波長敏感視蛋白表達明顯增多(P<0.05);紫光照射組比弱光照射組長波長敏感視蛋白mRNA表達明顯減少(P<0.01)。 結(jié)論:1、綠光(530nm)照射組背側(cè)和紫光(400nm)照射組腹側(cè)光感受器新陳代謝加強。2、長波長單色光誘導(dǎo)豚鼠近視眼長波長敏感視錐細胞明顯增多,長波長敏感視蛋白表達升高,這可能是光感受器細胞對單色光照射環(huán)境的一種代償性反應(yīng)。3、視蛋白表達可能參入了長波長單色光誘導(dǎo)豚鼠近視眼的形成。 第三部分形覺剝奪和光學(xué)離焦性豚鼠近視眼的視蛋白的表達變化 目的:研究形覺剝奪和光學(xué)離焦性豚鼠近視眼視蛋白的表達變化,探討視蛋白表達與試驗性近視眼之間的關(guān)系。 方法:20只豚鼠隨機分為形覺剝奪組和光學(xué)離焦組(n=10),形覺剝奪組豚鼠出生3天后單眼2周戴半透明(半透明薄膜貼于平鏡表面)RGP鏡片,光學(xué)離焦組豚鼠出生3天后單眼戴-4DRGP鏡片,另一眼為對照組。2周后各組分別測量屈光度、眼軸長度、玻璃體腔深度,并于上午10—12點鐘取材,實時熒光定量PCR觀察視蛋白mRNA的變化,Western-blot觀察視蛋白的變化,進行對比比較,統(tǒng)計分析。 結(jié)果:形覺剝奪組和光學(xué)離焦組相對于對照組短波長敏感視蛋白及長波長敏感視蛋白表達均增加(P<0.01)。 結(jié)論:1、視蛋白表達可能在試驗性豚鼠近視眼的形成中有重要作用。2、視錐細胞可能是感受形覺剝奪和光學(xué)離焦信息的部位。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】:復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】:博士
【學(xué)位授予年份】:2007
【分類號】:R778.11;R-332

【引證文獻】

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2 覃江圓;王超英;;光照與近視的關(guān)系[J];臨床誤診誤治;2011年07期

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1 劉睿;單色光對豚鼠和恒河猴眼屈光發(fā)育及光譜敏感性作用的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2008年

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1 覃江圓;不同光照形式對體外培養(yǎng)豚鼠視網(wǎng)膜色素上皮細胞Ca~(2+)濃度和TGF-β_2表達的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

2 曾穎;不同光譜的光照環(huán)境對恒河猴屈光發(fā)育的影響[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2012年



本文編號:2374364

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