【摘要】：目的和意義：本實驗以小鼠淋巴結淋巴細胞和正常人淋巴母細胞作為研究對象，以6 Gy γ射線照射作為凋亡的誘發(fā)因素，探討凋亡的發(fā)生及調(diào)控機理，以期能為淋巴細胞凋亡信號轉(zhuǎn)導機制提出一些新的觀點和見解，，為臨床上腫瘤放療患者和急性核事故病人放射線損傷的防治提供一條新的思路。 材料和方法：本實驗從整體和離體兩部分進行。在整體實驗中，用C57BL／6小鼠作為研究對象，于γ線照后不同時間點檢測淋巴結組織和淋巴細胞損傷效應、淋巴細胞凋亡率和凋亡相關基因及蛋白的變化規(guī)律，為Bcl-X_L調(diào)控機理的進一步研究提供依據(jù)。在體外實驗中，人AHH-1 T淋巴細胞經(jīng)6 Cy γ線照射后在不同時間點分別進行細胞凋亡率、存活率、細胞內(nèi)活性氧和線粒體跨膜電位的檢測，然后用轉(zhuǎn)基因細胞模型對Bcl-X_L調(diào)控凋亡的分子機制進行探討。 結果：(1)不同劑量γ線照射后，淋巴結組織嚴重受損，淋巴細胞顯著減少，在6-12 Gy范圍內(nèi)，淋巴細胞死亡方式以凋亡為主，15-20 Gy范圍內(nèi)以凋亡和壞死為主；(2)6 Gy γ線照射后淋巴結淋巴細胞出現(xiàn)大量凋亡，抗凋亡基因及其蛋白Bcl-2表達下降，促凋亡基因及其蛋白Bax表達上升；(3)6 Gy γ線照射后AHH-1細胞出現(xiàn)大量凋亡，細胞內(nèi)活性氧水平升高；(4)值得注意的是，用于檢測線粒體跨膜電位的Rh123熒光強度在凋亡早期沒有發(fā)生改變；(5)Bcl-X_L能有效抑制輻射誘發(fā)的T淋巴細胞活性氧產(chǎn)生及Caspase 3的切割活化。 結論：(1)凋亡是中等和中等以上劑量輻射誘導淋巴結淋巴細胞減少的主要原因；(2)輻射誘導淋巴細胞發(fā)生凋亡與Bcl-2的表達增加、Bax表達減少和活性氧水平的升高有關；(3)用于檢測線粒體跨膜電位的Rh123熒光強度在凋亡早期沒有發(fā)生改變，有關機制尚需進一步研究；(4)Bcl-X_L過表達能通過抑制活性氧的產(chǎn)生以及凋亡執(zhí)行蛋白Caspase 3的切割活化等方式有效抑制細胞凋亡的發(fā)生。
[Abstract]:Objective and significance: in this study, the lymphocytic cells of mouse lymph nodes and normal human lymphoblastic cells were used as the object of study, and 6 Gy 緯 -ray irradiation was used as the inducing factor of apoptosis, and the mechanism of the occurrence and regulation of apoptosis was discussed. In order to provide some new ideas for the mechanism of lymphocyte apoptosis signal transduction and provide a new idea for the prevention and treatment of radiation injury in patients with tumor radiotherapy and acute nuclear accident. Materials and methods: the experiment was carried out both in whole and in vitro. In the whole experiment, C57BL/6 mice were used as the research objects. At different time points after 緯 -ray irradiation, the damage effect of lymph nodes and lymphocytes, the apoptosis rate of lymphocytes and the changes of apoptosis-related genes and proteins were detected. It provides the basis for the further study of the regulation mechanism of Bcl-X_L. In vitro, the apoptosis rate, survival rate, intracellular reactive oxygen species and mitochondrial transmembrane potential of human AHH-1 T lymphocytes were measured at different time points after irradiation with 6 Cy 緯 rays. Then the molecular mechanism of apoptosis regulated by Bcl-X_L was studied by using transgenic cell model. Results: (1) after different doses of 緯 -ray irradiation, lymph node tissues were severely damaged and lymphocytes were significantly decreased. In 6-12 Gy, apoptosis was the main mode of lymphocyte death, and apoptosis and necrosis were dominant in 15-20 Gy; (2) after 6 Gy 緯 -ray irradiation, a large number of apoptosis occurred in lymph node lymphocytes, the expression of anti-apoptotic gene and its protein Bcl-2 decreased, and the expression of pro-apoptotic gene and its protein Bax increased; (3) A large number of apoptosis was observed in AHH-1 cells after irradiation with 6 Gy 緯 rays, and the level of reactive oxygen species increased. (4) the fluorescence intensity of Rh123, which was used to detect mitochondrial transmembrane potential, did not change at the early stage of apoptosis. (5) Bcl-X_L could effectively inhibit the production of reactive oxygen species (Ros) and the cleavage of Caspase 3 in T lymphocytes induced by radiation. Conclusion: (1) apoptosis is the main cause of lymphocytopenia induced by moderate or higher doses of radiation. (2) the apoptosis of lymphocytes induced by radiation is related to the increase of Bcl-2 expression, the decrease of Bax expression and the increase of reactive oxygen species level. (3) the fluorescence intensity of Rh123 used to detect mitochondrial transmembrane potential did not change at the early stage of apoptosis. (4) overexpression of Bcl-X_L can effectively inhibit apoptosis by inhibiting the production of reactive oxygen species and the cleavage and activation of apoptotic executive protein Caspase 3.
【學位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2006
【分類號】：R392

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本文編號：2310684