【摘要】：目的:通過克隆衛(wèi)氏并殖吸蟲線粒體環(huán)氧化酶亞單位Ⅰ基因(COⅠ)和核糖體基因第二間隔區(qū)(ITS2)來觀察上述兩個基因在并殖吸蟲的種別鑒定中的作用。 方法:飽和酚法提取衛(wèi)氏并殖吸蟲、斯氏并殖吸蟲、三平正并殖吸蟲、血吸蟲和兔基因組。利用引物PC 和PI 分別體外擴增獲得衛(wèi)氏并殖吸蟲目的基因后凝膠電泳鑒定并且膠回收純化上述兩個基因片段。利用TA 克隆將目的基因和載體連接,轉(zhuǎn)入TOPO10F’細胞,藍白篩選克隆。挑取陽性克隆,小抽提取質(zhì)粒行PCR 和酶切鑒定,陽性克隆送測序。將酶切后的COⅠ基因和ITS2 基因回收,地高辛標記成探針,尼龍膜上行斑點雜交觀察實驗結(jié)果。測序結(jié)果DNAMAN 分析。 結(jié)果:克隆產(chǎn)物測序結(jié)果經(jīng)DNAMAN 分析后發(fā)現(xiàn)本課題所使用的衛(wèi)氏并殖吸蟲福建株和衛(wèi)氏并殖吸蟲臺灣株、韓國Haenam 株、日本Hyogo 株有較大的同源性,屬于遺傳距離彼此較近的東北亞組。COⅠ基因和ITS2 基因隨機引物法地高辛標記探針和尼龍膜上點樣的已知基因組行斑點雜交反應,發(fā)現(xiàn)COⅠ探針只能和衛(wèi)氏并殖吸蟲基因組特異結(jié)合而發(fā)生顯色反應。有比較好的特異性和敏感性。而ITS2探針除了和衛(wèi)氏并殖吸蟲基因組結(jié)合外,還可以和兔基因組結(jié)合。 結(jié)論:本課題所建立的衛(wèi)氏并殖吸蟲的COⅠ和ITS2 基因克隆可以作為種系進化分析。根據(jù)COⅠ和ITS2 基因序列分析證明本課題所使用的衛(wèi)氏并殖吸蟲屬于遺傳距離彼此較近的東北亞組。尼龍膜斑點雜交結(jié)果顯示衛(wèi)氏并殖吸蟲的COⅠ基因片段可以初步作為種群鑒定的后備探針。
[Abstract]:Objective: to investigate the role of the two genes in the identification of paragonimus westermani by cloning the mitochondrial cyclooxygenase subunit 鈪，

本文編號：2295693