【摘要】：創(chuàng)面處理是成功救治大面積深度燒傷病人的關(guān)鍵問(wèn)題之一,及時(shí)、有效的覆蓋創(chuàng)面,將對(duì)后續(xù)治療產(chǎn)生積極的影響。同種異體皮膚移植為創(chuàng)面的覆蓋提供了一條良好的思路,但因其具有抗原性,移植后的排斥反應(yīng)嚴(yán)重影響了治療效果。免疫抑制劑雖可延長(zhǎng)其存活時(shí)間,但對(duì)于大面積燒傷病人而言,本身就處于一種免疫功能明顯低下?tīng)顟B(tài),大量抑制機(jī)體免疫力的抗排斥藥物的應(yīng)用反而增加了感染的危險(xiǎn)性。因此誘導(dǎo)受體對(duì)供體皮膚產(chǎn)生特異性的免疫低下或免疫耐受狀態(tài)而同時(shí)保持受體正常的免疫功能至關(guān)重要。 樹(shù)突狀細(xì)胞(dendritic cell,DC)是體內(nèi)功能最強(qiáng)的抗原呈遞細(xì)胞(antigen-presenting cell,APC),是天然免疫和獲得性免疫的重要調(diào)節(jié)劑。因其來(lái)源、發(fā)育階段和細(xì)胞表型等的不同而存在功能異質(zhì)性。而未成熟DC 由于其表面缺乏共刺激分子,不能夠提供T 細(xì)胞活化所必需的共刺激信號(hào),在免疫應(yīng)答過(guò)程中非但不能激活T 細(xì)胞,反而可誘導(dǎo)其無(wú)能,從而成為誘導(dǎo)移植免疫耐受的重要靶細(xì)胞。雖然DC 在體內(nèi)分布廣泛,但數(shù)量少且分散,而未成熟DC 主要分布在外周非淋巴組織內(nèi),直接分離、提純十分困難,不能滿足體內(nèi)或體外研究及臨床應(yīng)用的需要。同時(shí)在大面積燒傷病人體內(nèi)存在著大量的內(nèi)毒素(lipopolysaccharide,LPS)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)等促進(jìn)DC 成熟的物質(zhì),因而明顯影響了其致耐效果。白介素-10(interleukin-10,IL-10)是一種抗炎性細(xì)胞因子,在同種異體混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)中能抑制T 細(xì)胞的活化、增殖,有研究表明移植術(shù)前給予IL-10 可延長(zhǎng)移植物的存活時(shí)間。而DC 又是T 細(xì)胞活化的關(guān)鍵環(huán)節(jié),推測(cè)其抑制作用可能是通過(guò)對(duì)APC 功能的影響來(lái)實(shí)現(xiàn)的。 在本研究中,我們聯(lián)合應(yīng)用rhGM-CSF 和rhIL-4 體外誘導(dǎo)、擴(kuò)增人外周血分離的單個(gè)核細(xì)胞,第7d 同時(shí)加入rhIL-10 聯(lián)合培養(yǎng),于第9d 收獲細(xì)胞,從形態(tài)學(xué)、細(xì)胞表面標(biāo)志物以及混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)中對(duì)同種異體未致敏T 淋巴細(xì)胞刺激能力三個(gè)方面進(jìn)行鑒定。并將培養(yǎng)的細(xì)胞分別用LPS、TNF-α繼續(xù)刺激2 天,再進(jìn)行MLR,觀察IL-10 對(duì)外周血單個(gè)核細(xì)胞來(lái)源的未成熟DC 的影響,以期為體外獲得足夠數(shù)量
[Abstract]:Wound management is one of the key problems in the successful treatment of large area deep burn patients. Timely and effective covering of wounds will have a positive impact on subsequent treatment. Skin allograft provides a good idea for wound coverage, but the rejection after transplantation seriously affects the therapeutic effect because of its antigenicity. Although immunosuppressants can prolong their survival time, for large area burn patients, they are in a state of obviously low immune function, and the use of a large number of anti-rejection drugs to suppress the body's immunity increases the risk of infection. Therefore, it is important to induce the receptor to produce specific hypoimmunity or immune tolerance to the donor skin while maintaining the normal immune function of the receptor. Dendritic cells (dendritic cell,DC) are the most potent antigen-presenting cells (antigen-presenting cell,APC) and important modulators of innate and acquired immunity. Functional heterogeneity exists due to its origin, developmental stages and cell phenotypes. Due to the lack of costimulatory molecules on the surface of immature DC, it can not provide the necessary costimulatory signal for T cell activation. In the course of immune response, it can not activate T cell, but induce its incompetence. Thus, it becomes an important target cell to induce transplantation immune tolerance. Although DC is widely distributed in vivo, its quantity is small and dispersed, while immature DC is mainly distributed in peripheral non-lymphoid tissues. It is very difficult to separate and purify directly, and can not meet the needs of research and clinical application in vivo or in vitro. At the same time, there are a lot of endotoxin (lipopolysaccharide,LPS) and tumor necrosis factor- 偽 (TNF- 偽) in large area burn patients to promote the maturation of DC. Interleukin-10 (interleukin-10,IL-10) is an anti-inflammatory cytokine, which can inhibit the activation and proliferation of T cells in allogeneic mixed lymphocyte reaction. Some studies have shown that IL-10 can prolong the survival time of grafts before transplantation. DC is the key link of T cell activation. It is speculated that the inhibitory effect of DC may be through the effect on APC function. In this study, the mononuclear cells isolated from human peripheral blood were amplified by rhGM-CSF and rhIL-4 in vitro, then co-cultured with rhIL-10 on the 7th day. The cells were harvested on the 9th day. Cell surface markers and the stimulating ability of allogeneic unsensitized T lymphocytes in mixed lymphocyte reaction (MLR) were identified. The cultured cells were further stimulated with LPS,TNF- 偽 for 2 days, and then MLR, was performed to observe the effect of IL-10 on immature DC from peripheral blood mononuclear cells in order to obtain sufficient quantity in vitro.
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號(hào)】：R644;R392

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本文編號(hào)：2252594