本文選題：RNA干擾　切入點(diǎn)：轉(zhuǎn)染　出處：《中國醫(yī)藥生物技術(shù)》2014年05期

【摘要】：目的探討人工合成RNA轉(zhuǎn)染人外周血原代T淋巴細(xì)胞的有效方法。方法從人外周血分離原代T淋巴細(xì)胞,采用Lipofectamine2000、Lipofectamine RNAiMAX、FuGENE6、Hiperfect和EntransterTM-R 5種不同轉(zhuǎn)染試劑介導(dǎo)熒光標(biāo)記的RNA轉(zhuǎn)染原代T淋巴細(xì)胞,通過熒光顯微鏡觀察及流式細(xì)胞術(shù)檢測進(jìn)行轉(zhuǎn)染效率評價(jià)。結(jié)果分離的人外周血原代T淋巴細(xì)胞的純度達(dá)到87.4%。采用上述5種轉(zhuǎn)染試劑介導(dǎo)熒光標(biāo)記的RNA轉(zhuǎn)染T淋巴細(xì)胞,24 h后轉(zhuǎn)染效率分別為(14.81±1.03)%、(14.33±1.24)%、(2.10±0.16)%、(1.69±0.08)%、(72.24±1.26)%。采用EntransterTM-R轉(zhuǎn)染100及50 nmol/L對照RNA,24 h后轉(zhuǎn)染效率分別為73.7%和56.0%;EntransterTM-R轉(zhuǎn)染100 nmol/L對照RNA后48、72 h熒光標(biāo)記細(xì)胞陽性率分別為62.0%、56.6%。結(jié)論轉(zhuǎn)染試劑EntransterTM-R可有效介導(dǎo)人工合成RNA轉(zhuǎn)染人外周血原代T淋巴細(xì)胞。
[Abstract]:Objective to investigate the effective method of transfection of human primary T lymphocytes with synthetic RNA. Methods Primary T lymphocytes were isolated from human peripheral blood and transfected into primary T lymphocytes by Lipofectamine RNAiMAXFGENE6 HiPerfect and EntransterTM-R. The transfection efficiency was evaluated by fluorescence microscopy and flow cytometry. Results the purity of the primary T lymphocytes isolated from human peripheral blood was 87.4%. The transfection of T lymphocytes was mediated by the five transfection reagents and labeled by RNA. After 24 hours, the transfection efficiency was 14.81 鹵1.03 and 14.33 鹵1.24 respectively. The positive rates of EntransterTM-R transfection reagent EntransterTM-R were 73.7% and 56.0%, respectively. The positive rates of fluorescent labeled cells were 62.0% and 56.72 h after transfection of 100 nmol/L control RNA and 50 nmol/L TM-R, respectively. Conclusion the positive rates of EntransterTM-R transfection reagent can be 62.0% and 56.6 h after transfection of 100 nmol/L control RNA and 50 nmol/L TM-R, respectively, and the transfection efficiency is 73.7% and 56.0%, respectively. Conclusion the positive rates of EntransterTM-R transfection reagent EntransterTM-R can be 62.0% and 56.6 h after transfection of 100 nmol/L control RNA and 50 nmol/L TM-R, respectively, and the transfection efficiency is 14.81 鹵1.03 and 14.33 鹵1.24 and 2.10 鹵0.16, respectively. Transfection of human peripheral blood primary T lymphocytes by artificial synthesis of RNA.
【作者單位】： 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院肝病中心;首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院肝硬化轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院普外科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81000172、81370544) 北京市自然科學(xué)基金(7142043) 王寶恩肝纖維化研究基金(20120131)
【分類號】：R392

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

1 張恒輝;費(fèi)然;謝興旺;王莉;羅昊;王雪艷;魏來;陳紅松;;Foxp3 siRNA特異性抑制肝癌患者調(diào)節(jié)性T細(xì)胞進(jìn)而增強(qiáng)抗腫瘤免疫應(yīng)答的體外實(shí)驗(yàn)研究[J];北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2009年03期

2 李興花;何敏;于艷輝;陳寧;盧思廣;;小干擾RNA干擾人CD4~+CD_(25)-T淋巴細(xì)胞MLL1基因的表達(dá)[J];實(shí)用兒科臨床雜志;2011年21期

3 王玉潔;吳韶菊;吳芹;;篩選介導(dǎo)化學(xué)合成siRNA轉(zhuǎn)染原代肝癌細(xì)胞的最佳試劑[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2011年02期

4 董貴成;樂江;博·格日勒圖;;siRNA干擾跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白21的表達(dá)對KO小鼠胚胎成纖維細(xì)胞γ分泌酶活性的影響[J];中國醫(yī)藥生物技術(shù);2008年02期

5 王世瑤;劉燕鷹;穆榮;栗占國;;RNA干擾技術(shù)新進(jìn)展[J];中國醫(yī)藥生物技術(shù);2009年05期

6 王欽富;李坤;李志;徐娜;董敏;韓慧;;靶向Tak1基因的siRNA干擾對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)[J];中國醫(yī)藥生物技術(shù);2011年01期

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王金濤;鄭軍;劉偉;夏聯(lián)山;;不同靶向基因siRNA對肝癌細(xì)胞作用機(jī)制的研究進(jìn)展[J];重慶醫(yī)學(xué);2012年10期

2 Lu Ming;Wang Xin;Feng Lin-he;Yan Yun-qin;;Construction and Screening of Bovine Bax Gene shRNA Interference Expression Vector[J];Journal of Northeast Agricultural University(English Edition);2013年03期

3 張燕;李紅陽;曹詠梅;;沉默信息調(diào)節(jié)因子1調(diào)控膽固醇合成對大鼠視神經(jīng)損傷后RGCs修復(fù)的作用機(jī)制[J];國際眼科雜志;2014年10期

4 馬世俊;馬軍德;賈斌;申紅;王緒海;張挺軍;郭玉強(qiáng);蔡國寶;;高效抑制小鼠精子zfx基因shRNA分子的篩選[J];石河子大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2013年04期

5 劉立寶;黃蕾;張軍航;廖洪映;胡愛玲;許世磊;華平;;Caspase-3 siRNA減少骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞穩(wěn)定株細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究[J];器官移植;2014年05期

6 郭凈;王菊勇;鄭展;王青;;轉(zhuǎn)錄因子Foxp3與惡性腫瘤的研究進(jìn)展[J];腫瘤防治研究;2011年07期

7 蘇傳麗;羅殿中;陳罡;覃新干;;小干擾RNA靶向抑制DcR3基因?qū)Ω伟┘?xì)胞凋亡和遷移的影響[J];世界華人消化雜志;2013年27期

8 趙燕穎;李亞剛;趙春燕;楊澤成;張舵舵;孫遠(yuǎn)杰;;小干擾RNA抑制MDM2對HepG2細(xì)胞的影響及機(jī)制[J];中國老年學(xué)雜志;2014年01期

9 付常振;昝林森;王虹;成功;王洪寶;李耀坤;姜碧杰;高建斌;楊寧;;牛SREBP1基因shRNA序列的篩選及其腺病毒載體的構(gòu)建與鑒定[J];中國農(nóng)業(yè)科學(xué);2013年23期

10 孫玉梅;張金盈;閆繼鋒;袁斌;楊鵬偉;李文;于運(yùn)福;;轉(zhuǎn)導(dǎo)骨橋蛋白短發(fā)夾狀RNA預(yù)防動脈粥樣硬化模型兔血管成形后的再狹窄[J];中國組織工程研究;2014年18期

相關(guān)會議論文 前1條

1 趙煒;陸娣;趙樹進(jìn);;RNAi研究進(jìn)展[A];2014年廣東省藥師周大會論文集[C];2014年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 宋少華;SOCS1基因修飾的骨髓樹突狀細(xì)胞對同種移植排斥的治療作用及其機(jī)理[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2010年

2 柯霞;靶向脫氧核酶抑制鼻咽癌EBV-LMP1基因表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2010年

3 黃莉;基因與蛋白水平抑制B7/CD28信號通路對狼瘡樣腎炎模型的逆轉(zhuǎn)效應(yīng)及分子機(jī)制研究[D];蘇州大學(xué);2013年

4 奚海林;基因干擾肝腸鈣黏蛋白抑制胃癌MKN28細(xì)胞生長的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究[D];華中科技大學(xué);2013年

5 胡恭華;Polη在肝細(xì)胞對氫醌所致DNA損傷反應(yīng)中的作用機(jī)制研究[D];中南大學(xué);2013年

6 曾瀚慶;肝再生增強(qiáng)因子對多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞增殖的影響及其機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

7 肖科;VEGF-A，VEGF-C及MMP-2表達(dá)調(diào)控膽管癌增殖、侵襲轉(zhuǎn)移能力及細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究[D];中南大學(xué);2012年

8 錢江;RNA干擾Slug基因?qū)Y(jié)腸癌HCT116細(xì)胞生物學(xué)行為影響及其機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

9 王景毅;干擾素調(diào)節(jié)因子2在乳腺癌病理學(xué)中作用的相關(guān)研究[D];吉林大學(xué);2013年

10 常亞萍;siRNA設(shè)計(jì)中若干關(guān)鍵問題的研究[D];吉林大學(xué);2013年

【二級參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 孫磊;吳靜靜;易壽南;陳麗;;人CD4~+CD25~+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的體外培養(yǎng)擴(kuò)增[J];山東大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2010年12期

2 王照娟;陳龍華;劉鑫;侯桂華;;CD4~+CD25~+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在臨床中的應(yīng)用[J];生命的化學(xué);2010年05期

3 ;Blocking effects of siRNA on VEGF expression in human colorectal cancer cells[J];World Journal of Gastroenterology;2010年09期

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張新華,鐘翠平;樹突狀細(xì)胞與移植免疫的研究進(jìn)展[J];解剖科學(xué)進(jìn)展;2003年01期

2 張麗君 ,郭勇 ,丁煥文 ,王捷 ,張宏斌 ,鄭文嶺;pEGFP-bFGF重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞的條件優(yōu)化[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2003年01期

3 邱江鋒,吳志勇,羅春霞;誘導(dǎo)型一氧化氮合酶基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建與表達(dá)[J];肝膽外科雜志;2003年06期

4 劉希民,葛林阜,馬煥文;高滴度逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的4種方法轉(zhuǎn)染小鼠T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)染率比較[J];青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2004年02期

5 李克;劉瑞敏;韓雪飛;馬嵐;邢瑩;;端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶基因修飾人骨髓間質(zhì)干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)(英文)[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2007年11期

6 楊波;高建華;魯峰;朱茗;;腺病毒重組綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)染脂肪組織來源干細(xì)胞的特點(diǎn)[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2007年33期

7 楊立娜;葉玲;劉靜;劉建偉;陰大偉;杜明梅;;雄激素受體基因第一外顯子區(qū)CAG缺失的構(gòu)建及其在HEK293細(xì)胞中的表達(dá)[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2007年37期

8 閆媛;章杰;楊渝珍;過健俐;李禹瓊;;重疊延伸PCR法構(gòu)建人腫瘤壞死因子前體水解酶系列突變重組體及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞株的建立[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2008年01期

9 金炎;趙雪;劉曉雯;徐潔;王勇;趙躍然;;人NKp30基因克隆及其真核表達(dá)載體的構(gòu)建[J];山東醫(yī)藥;2008年48期

10 鄭薇;譚建;李瑋;李寧;許靜;;裸鼠模型的人鈉/碘轉(zhuǎn)運(yùn)體基因轉(zhuǎn)染人大細(xì)胞肺癌介導(dǎo)放射性核素顯像[J];中國醫(yī)學(xué)影像技術(shù);2009年01期

相關(guān)會議論文 前10條

1 傅新巧;張?zhí)K明;褚倩;肖文伍;;大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞轉(zhuǎn)染人TH基因的實(shí)驗(yàn)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

2 李成仁;蔡文琴;李巍;蘇炳銀;;NOV基因轉(zhuǎn)染對神經(jīng)干細(xì)胞增殖、分化的影響[A];解剖學(xué)雜志——中國解剖學(xué)會2002年年會文摘匯編[C];2002年

3 傅躍先;張強(qiáng);康權(quán);甘立強(qiáng);羅慶;劉燕;;腺病毒介導(dǎo)骨形態(tài)蛋白-9基因轉(zhuǎn)染脂肪干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會燒傷外科學(xué)分會2009年學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2009年

4 秦書儉;鄭仕杰;單偉;鄭德宇;;siRNA沉默HLA-A2表達(dá)的hBMSCs對人異體T淋巴細(xì)胞分泌功能及其誘導(dǎo)成骨能力的影響[A];中國解剖學(xué)會2011年年會論文文摘匯編[C];2011年

5 劉學(xué)政;侯陽;左中夫;;pEGFP/Ang-1轉(zhuǎn)染大鼠BMSCs對高糖環(huán)境中視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用[A];中國解剖學(xué)會2011年年會論文文摘匯編[C];2011年

6 陳衛(wèi)華;王躍閩;;沉默cb1-b siRNA轉(zhuǎn)染對小鼠淋巴細(xì)胞免疫活性的影響[A];華東六省一市泌尿外科學(xué)術(shù)年會暨2011年浙江省泌尿外科、男科學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2011年

7 李蕾;王潤田;王兆源;楊永杰;葛錫銳;王蕙芬;;模擬mIL—18天然生成的真核表達(dá)體系的構(gòu)建3—A—W5—78—P及其生物學(xué)活性的初步研究[A];中國免疫學(xué)會第四屆學(xué)術(shù)大會會議議程及論文摘要集[C];2002年

8 袁即山;利天增;祁少海;謝舉臨;徐盈斌;潘姝;張瓏娟;孔慶瑜;;人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞最佳轉(zhuǎn)染條件：α_1(Ⅰ)型前膠原基因反義寡核苷酸轉(zhuǎn)染的實(shí)驗(yàn)[A];第八屆全國燒傷外科學(xué)年會論文匯編[C];2007年

9 胡大海;湯朝武;陳璧;;脂質(zhì)體介導(dǎo)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染角朊細(xì)胞的影響因素[A];中華醫(yī)學(xué)會第六屆全國燒傷外科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2001年

10 薛美思;劉毅;;攜帶人胰島素基因慢病毒載體轉(zhuǎn)染臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會整形外科學(xué)分會第十一次全國會議、中國人民解放軍整形外科學(xué)專業(yè)委員會學(xué)術(shù)交流會、中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會醫(yī)學(xué)美容專業(yè)委員會全國會議論文集[C];2011年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 白毅;上海創(chuàng)建大規(guī)模細(xì)胞DNA轉(zhuǎn)染技術(shù)平臺[N];中國醫(yī)藥報(bào);2005年

2 張中橋;NDRG2可誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞HepG2凋亡[N];中國醫(yī)藥報(bào);2004年

3 吳一福;川大成功建立人新基因PCIA1細(xì)胞株[N];中國醫(yī)藥報(bào);2006年

4 吳軍　楊太成;主動特異性免疫療法治療腫瘤[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2003年

5 馬昕皓;癌癥基因治療傳遞系統(tǒng)現(xiàn)狀[N];中國醫(yī)藥報(bào);2004年

6 婁彥艷 魏于全;腫瘤基因與分子疫苗面面觀[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2001年

7 王全楚;組織工程化血管離臨床有多遠(yuǎn)[N];健康報(bào);2005年

8 李杰;抗原特異TCR基因修飾T細(xì)胞技術(shù)的建立和應(yīng)用[N];科技日報(bào);2007年

9 余志平;腫瘤聚糖新藥研發(fā)瞄準(zhǔn)聚糖形成[N];中國醫(yī)藥報(bào);2005年

10 本報(bào)記者 靖九江;探尋病毒性肝炎的未知世界[N];中國醫(yī)藥報(bào);2002年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 饒小泉;MBD2基因缺陷促進(jìn)血管生成并改善小鼠下肢缺血損傷[D];華中科技大學(xué);2011年

2 馬天容;對新型內(nèi)皮脂酶價(jià)值的初步研究[D];山東大學(xué);2005年

3 江n;低強(qiáng)度脈沖超聲波對大鼠脂肪干細(xì)胞增殖和成骨分化的影響及成骨機(jī)制的初步研究[D];華中科技大學(xué);2012年

4 張利軍;IQGAP1在肺炎衣原體感染誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞粘附和遷移中的作用[D];天津醫(yī)科大學(xué);2011年

5 劉家云;siRNA對HepG2 2.2.15細(xì)胞和轉(zhuǎn)基因小鼠中HBV的基因表達(dá)及復(fù)制的抑制作用研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2005年

6 黃清玲;乙型肝炎病毒全基因水平對HepG2細(xì)胞的影響及其機(jī)制的初步研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2008年

7 張貴星;光誘導(dǎo)表達(dá)載體的構(gòu)建及其在鹽藻除草劑抗性轉(zhuǎn)化中的應(yīng)用[D];鄭州大學(xué);2003年

8 陳健;預(yù)缺氧的神經(jīng)保護(hù)作用及其線粒體機(jī)制[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2004年

9 郭冬平;超聲/微泡法介導(dǎo)外源性基因在細(xì)胞系和動物體內(nèi)定向性表達(dá)的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2006年

10 桂伶俐;核因子-κB亞基p50和p65對永生化神經(jīng)前體細(xì)胞存活的影響及機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2007年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 劉春江;大鼠胎腦神經(jīng)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及電穿孔轉(zhuǎn)染[D];中南大學(xué);2009年

2 閆德雄;整合素β1在人表皮細(xì)胞分化中作用的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2006年

3 宋曉妍;人生長激素真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其瞬時(shí)表達(dá)[D];鄭州大學(xué);2006年

4 譚琪;SV40T熒光真核表達(dá)載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)染大鼠胰島細(xì)胞的研究[D];暨南大學(xué);2008年

5 邵明斌;轉(zhuǎn)染外源性prohibitin在缺氧性腎小管上皮細(xì)胞損傷中的作用及機(jī)制[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2012年

6 壽奮勇;脂質(zhì)體介導(dǎo)的pIRES2-EGFP-NT-3轉(zhuǎn)染骨髓基質(zhì)細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2010年

7 姚曦;蛋白激酶C-α對水通道蛋白2轉(zhuǎn)運(yùn)的調(diào)節(jié)作用研究[D];華中科技大學(xué);2011年

8 李新軍;PDIA3對結(jié)腸粘膜上皮細(xì)胞增殖和凋亡影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];暨南大學(xué);2013年

9 惠捷;上調(diào)Twist基因?qū)W480細(xì)胞株體外增殖及侵襲性影響的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

10 許勝貴;BMP-2慢病毒載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)染后骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞骨軟骨分化的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2012年

，

本文編號：1692543