本文選題：CD2　切入點：OX34　出處：《第四軍醫(yī)大學》2006年博士論文

【摘要】：目的：本實驗設(shè)計引物分別克隆抗人CD2單抗OX34 Fd和輕鏈基因以及輕、重鏈可變區(qū)基因V_H和V_L，然后將OX34 Fd和輕鏈基因克隆入噬菌體展示載體pComb3；將輕、重鏈可變區(qū)基因V_L和V_H先后克隆入人-鼠嵌合Fab抗體的通用噬菌體展示載體pComb3C，得到OX34的Fab片段抗體展示載體pComb3／Fab-gⅢ和嵌合Fab片段抗體展示載體pComb3C／cFab-gⅢ，以噬菌體展示Fab抗體的形式對其特異性和親和力進行驗證。之后，切除載體gⅢ序列，構(gòu)建成OX34—Fab和OX34—cFab的分泌性表達載體，在大腸桿菌中進行誘導表達、純化，并進行初步的功能鑒定。 方法： 1、鼠抗人CD2抗體輕、重鏈基因片段的擴增 從雜交瘤細胞株中提取總RNA。設(shè)計引物，利用RT-PCR擴增抗體Fd和輕鏈基因以及輕、重鏈可變區(qū)基因V_H和V_L，得到目的片段。分別連入pMD18—T載體后，進行序列測定，并利用相應的軟件對序列進行分析。 2、鼠抗人CD2 Fab片段抗體的制備 將輕鏈及Fd基因依次克隆到載體pComb3中，建成噬菌體表達載體pComb3／Fab-gⅢ。轉(zhuǎn)化大腸桿菌XL1-blue，并利用輔助噬菌體M13K07進行挽救，，得到噬菌體展示Fab抗
[Abstract]:Objective: to clone the OX34 FD and light chain genes of human CD2 monoclonal antibody and the genes of light and heavy chain variable region VH and VL respectively, and then clone OX34 FD and light chain genes into phage display vector pComb3, and then clone them into the phage display vector pComb3, and then clone them into the phage display vector pComb3, then clone them into the phage display vector pComb3. The heavy chain variable region gene (VSTL) was cloned into the universal phage display vector pComb3C of human-mouse chimeric Fab antibody, and the Fab fragment antibody display vector pComb3/Fab-g 鈪

本文編號：1690165