本文選題：線蟲(chóng)抗凝肽　切入點(diǎn)：表達(dá)　出處：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2005年碩士論文

【摘要】：動(dòng)靜脈血栓形成是人類發(fā)病及死亡的主要原因,現(xiàn)有的抗凝血藥物由于副作用較大,在治療凝血功能異常中的應(yīng)用比較局限,所以新型抗凝藥物的開(kāi)發(fā)具有重要的臨床意義。線蟲(chóng)抗凝肽(Nematode anticoagulant peptides,NAPs)是一類從犬鉤口線蟲(chóng)體內(nèi)提取的小分子多肽類物質(zhì),這類多肽具有高效抗凝作用,皮摩爾濃度就可以抑制血液凝集,因此重組線蟲(chóng)抗凝肽(Recombinant nematode anticoagulant peptide,rNAP)有望開(kāi)發(fā)成一種新型的高效抗凝藥物。 目的 本研究采用大腸桿菌(Escherichia coli, E. coli)融合表達(dá)rNAP5,并進(jìn)行了純化及活性方面的研究,以期為新型抗凝藥物的開(kāi)發(fā)應(yīng)用打下基礎(chǔ)。 方法與結(jié)果 1.表達(dá)載體的構(gòu)建及目的蛋白的表達(dá) 含有融合E. coli硫氧還原蛋白(Thioredoxin,TRX)的NAP5全基因序列的質(zhì)粒pET11a/TRX-rNAP前期已經(jīng)由本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建,為了方便后期的純化工作,本研究中以pET11a/TRX-rNAP質(zhì)粒為模板,PCR擴(kuò)增出HIS-TRX-rNAP全長(zhǎng)序列,插入pET11a載體的NdeI和BamHI酶切位點(diǎn)之間,構(gòu)建出pET11a/HIS-TRX-rNAP表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化入DH5α菌株,經(jīng)測(cè)序證實(shí)成功地在TRX-rNAP序列前方插入8個(gè)組氨酸(Histidine,HIS)三聯(lián)密碼子。將測(cè)序正確的質(zhì)粒在E. coli BL21(DE3)菌株中經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá),并通過(guò)SDS-PAGE及Western blot檢測(cè)證實(shí),融合蛋白HIS-TRX-rNAP在
[Abstract]:Anticoagulant peptide ( rNAP ) is a kind of new kind of high - efficiency anticoagulant peptide , which can inhibit blood coagulation because of its high anti - coagulation effect , and thus the recombinant nematode anticoagulant peptide ( rNAP ) is expected to be developed into a new kind of high - efficiency anticoagulant .








Objective To study the fusion expression of rNAP5 by Escherichia coli and E . coli , and to study the purification and activity of rNAP5 , in order to lay a foundation for the development and application of new anticoagulant drugs .








Methods and Results








1 . Construction of expression vector and expression of target protein








In order to facilitate the later purification , the full - length sequence of the plasmid pET11a / trNAP was amplified by PCR . The recombinant plasmid pET11a / HIS - rNAP was inserted between the NdeI and BamHI sites of the pET11a vector . The recombinant plasmid pET11a / HIS - trNAP was inserted into the sequence of the pET11a / HIS - rNAP expression vector . The recombinant plasmid pET11a / HIS - trNAP was inserted into the sequence of the pET11a / HIS - rNAP expression vector . The recombinant plasmid pET11a / HIS - rNAP was inserted into the sequence of the pET11a / HIS - rNAP expression vector . The recombinant plasmid pET11a / HIS - rNAP was inserted into the E . coli BL21 ( DE3 ) strain to induce the expression of the three - linked codons .

【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號(hào)】：R346

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