本文選題：線蟲抗凝肽　切入點：表達　出處：《安徽醫(yī)科大學》2005年碩士論文

【摘要】：動靜脈血栓形成是人類發(fā)病及死亡的主要原因,現有的抗凝血藥物由于副作用較大,在治療凝血功能異常中的應用比較局限,所以新型抗凝藥物的開發(fā)具有重要的臨床意義。線蟲抗凝肽(Nematode anticoagulant peptides,NAPs)是一類從犬鉤口線蟲體內提取的小分子多肽類物質,這類多肽具有高效抗凝作用,皮摩爾濃度就可以抑制血液凝集,因此重組線蟲抗凝肽(Recombinant nematode anticoagulant peptide,rNAP)有望開發(fā)成一種新型的高效抗凝藥物。 目的 本研究采用大腸桿菌(Escherichia coli, E. coli)融合表達rNAP5,并進行了純化及活性方面的研究,以期為新型抗凝藥物的開發(fā)應用打下基礎。 方法與結果 1.表達載體的構建及目的蛋白的表達 含有融合E. coli硫氧還原蛋白(Thioredoxin,TRX)的NAP5全基因序列的質粒pET11a/TRX-rNAP前期已經由本實驗室構建,為了方便后期的純化工作,本研究中以pET11a/TRX-rNAP質粒為模板,PCR擴增出HIS-TRX-rNAP全長序列,插入pET11a載體的NdeI和BamHI酶切位點之間,構建出pET11a/HIS-TRX-rNAP表達載體,轉化入DH5α菌株,經測序證實成功地在TRX-rNAP序列前方插入8個組氨酸(Histidine,HIS)三聯密碼子。將測序正確的質粒在E. coli BL21(DE3)菌株中經IPTG誘導表達,并通過SDS-PAGE及Western blot檢測證實,融合蛋白HIS-TRX-rNAP在
[Abstract]:Anticoagulant peptide ( rNAP ) is a kind of new kind of high - efficiency anticoagulant peptide , which can inhibit blood coagulation because of its high anti - coagulation effect , and thus the recombinant nematode anticoagulant peptide ( rNAP ) is expected to be developed into a new kind of high - efficiency anticoagulant .








Objective To study the fusion expression of rNAP5 by Escherichia coli and E . coli , and to study the purification and activity of rNAP5 , in order to lay a foundation for the development and application of new anticoagulant drugs .








Methods and Results








1 . Construction of expression vector and expression of target protein








In order to facilitate the later purification , the full - length sequence of the plasmid pET11a / trNAP was amplified by PCR . The recombinant plasmid pET11a / HIS - rNAP was inserted between the NdeI and BamHI sites of the pET11a vector . The recombinant plasmid pET11a / HIS - trNAP was inserted into the sequence of the pET11a / HIS - rNAP expression vector . The recombinant plasmid pET11a / HIS - trNAP was inserted into the sequence of the pET11a / HIS - rNAP expression vector . The recombinant plasmid pET11a / HIS - rNAP was inserted into the sequence of the pET11a / HIS - rNAP expression vector . The recombinant plasmid pET11a / HIS - rNAP was inserted into the E . coli BL21 ( DE3 ) strain to induce the expression of the three - linked codons .

【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2005
【分類號】：R346

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