本文選題：活性氧　切入點：缺氧　出處：《中國病理生理雜志》2014年11期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的:觀察急性缺氧時大鼠肺動脈平滑肌細胞(PASMCs)線粒體活性氧(ROS)的變化。方法:分離并培養(yǎng)大鼠PASMCs,常氧(35℃、5%CO2、21%O2、74%N2)和急性缺氧(35℃、5%CO2、1%O2、94%N2)條件下,利用分子探針chloromethyl dichlorodihydrofluorescein diacetate(CM-H2DCF/DA)和Redox Sensor Red CC-1通過激光共聚焦顯微鏡來檢測細胞內(nèi)ROS的生成量;直接分離線粒體,用線粒體電子傳遞鏈(ETC)復合物抑制劑通過熒光分光光度計檢測線粒體ROS及其生成的具體位點。結(jié)果:急性缺氧細胞內(nèi)ROS生成明顯增加,其中缺氧組H2O2較常氧組增加3.35倍(P0.01),而H2O2及O-·2較常氧組增加1.61倍(P0.01)。與缺氧組比,用線粒體ETC復合物I抑制劑MPP、復合物II抑制劑NPA和TTFA及復合物III前泛半醌位點抑制劑myxothiazol都能顯著降低缺氧時PASMCs胞內(nèi)ROS的生成量(分別降低60%、73%、75%和61%,P0.01);而復合物III后泛半醌位點抑制劑antimycin A及復合物IV抑制劑Na N3對ROS的生成無明顯影響(升高13%和9.1%,P0.05)。直接檢測線粒體ROS與測定細胞內(nèi)ROS結(jié)果一致。結(jié)論:急性缺氧PASMCs線粒體ROS(主要是H2O2)的生成量明顯增加;其生成位點主要是線粒體ETC復合物Ⅰ、Ⅱ及III前泛半醌位點,而與復合物III后泛半醌位點和IV位點無明顯關(guān)系。
[Abstract]:Objective: To observe the effect of acute hypoxia on rat pulmonary artery smooth muscle cells (PASMCs) of mitochondrial reactive oxygen species (ROS) changes. Methods: isolated and cultured rat PASMCs, normoxia (at 35 5%CO2,21%O2,74%N2) and acute hypoxia (35 C, 5%CO2,1%O2,94%N2) under the condition of using molecular probe chloromethyl dichlorodihydrofluorescein diacetate (CM-H2DCF/DA) and Redox Sensor Red CC-1 by laser scanning confocal microscope to detect intracellular ROS production; mitochondria isolated directly, with the mitochondrial electron transfer chain (ETC) inhibitor complexes by fluorescence spectrophotometer to detect specific sites of mitochondrial ROS and its formation. Results: acute hypoxia significantly increased intracellular ROS generation, which is often H2O2 hypoxia group oxygen group increased 3.35 times (P0.01), H2O2 and O- 2 compared with normoxia group increased 1.61 times (P0.01) and hypoxia group. Compared with mitochondrial ETC complex I inhibitor MPP, complex II inhibition Agent NPA and TTFA and III complexes before ubisemiquinone site inhibitor myxothiazol can significantly reduce the amount of hypoxia generated PASMCs intracellular ROS (respectively reduced 60%, 73%, 75% and 61%, P0.01); and III complex after ubisemiquinone site inhibitor antimycin A and complex IV inhibitor Na N3 on ROS generation has no obvious effect (increased by 13% and 9.1%, P0.05). The direct detection of mitochondrial ROS and determination of intracellular ROS results. Conclusion: acute hypoxia PASMCs mitochondrial ROS (H2O2) production increased significantly; the main site is ETC mitochondrial complexes I, II and III before ubisemiquinone sites, and with the complex III ubisemiquinone loci and IV loci showed no significant relationship.

【作者單位】： 寧夏人民醫(yī)院總院呼吸內(nèi)科;寧夏人民醫(yī)院心血管內(nèi)科;第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院呼吸內(nèi)科;
【基金】：國家自然科學基金資助項目(No.81160011) 寧夏回族自治區(qū)科技攻關(guān)資助項目(寧陜合作)(No.2012ZYH225)
【分類號】：R364

【參考文獻】

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【共引文獻】

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本文編號：1627177