本文選題：M細胞　切入點：高效液相色譜　出處：《大連醫(yī)科大學》2007年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】： 目的: 肺癌作為嚴重威脅人類健康的重大疾病,其發(fā)病率和死亡率均居惡性腫瘤之首,其主要原因在于傳統(tǒng)的影像學和細胞學診斷還不能有效地檢測出早期肺癌,多數(shù)患者一經(jīng)發(fā)現(xiàn)已經(jīng)轉(zhuǎn)移。因此,尋求新的、有效的早期診斷技術(shù)對于降低肺癌死亡率具有非常重要的意義。本論文的研究工作期望通過血漿檢測發(fā)展肺癌早期診斷的有效方法,為進一步探討肺組織惡變的機制,尋找可能的癌癥早期診斷標記物提供基礎的研究資訊。 方法: M細胞系是SV40-Large T抗原轉(zhuǎn)化的人支氣管上皮永生化細胞系,為研究細胞從正常到癌變過程中的遺傳學的改變提供了良好的模型。我們利用M細胞系作為模型,在無血清培養(yǎng)集中培養(yǎng)后,收集分泌蛋白,經(jīng)濃縮、除鹽處理,進一步采用凝膠分離(SDS-PAGE)、高效液相色譜(HPLC)、二維高效液相色譜(2D-HPLC)與質(zhì)譜(MS)聯(lián)用技術(shù)對不同代數(shù)永生化支氣管上皮細胞的分泌蛋白加以研究,說明肺癌發(fā)生過程中分泌蛋白分布的變化特征。 結(jié)果: 1.SDS-PAGE的實驗結(jié)果表明,在MP49中,分泌蛋白的分子量分布較廣,幾乎在10-100kD范圍內(nèi)都有蛋白分布。相反,在MP188中,分泌蛋白主要集中在高分子量和低分子量范圍內(nèi)(60kD,10kD),而在10-50kD范圍內(nèi)蛋白含量較小。 2.兩個樣品得到的酶解產(chǎn)物的疏水性質(zhì)相似,但是在MP49的分泌蛋白中含有一些疏水性較強的肽段,而MP188的分泌蛋白中親水性肽段較多。 3.2D-HPLC/MS分析肽段的分布。在MP49的分泌蛋白中含有更多的肽段,肽段的疏水性質(zhì)與被檢測的離子的質(zhì)荷比分布較為均勻。而MP188分泌蛋白的酶解產(chǎn)物則數(shù)量較少,主要得到一些質(zhì)荷比相對較小的肽段。 4.強陽離子交換色譜對酶解產(chǎn)物肽段分布加以評價,MP49中顯酸性的肽段較多。 5.采用質(zhì)譜結(jié)合數(shù)據(jù)庫對兩個樣品中的蛋白質(zhì)加以鑒定。對MP49,可以確定120個蛋白;對MP188;可以確定85個蛋白。 結(jié)論: 1.采用SDS-PAGE和HPLC、2D-HPLC分離結(jié)合MS檢測技術(shù)對不同代數(shù)的永生化支氣管上皮細胞MP49和MP188的分泌蛋白分布加以研究。結(jié)果表明:隨著代數(shù)越大,其蛋白質(zhì)的分子量分布將逐漸向高分子量范圍和低分子量范圍過渡,而相對中等分子量的蛋白質(zhì)逐漸減少。 2.MP49對比MP188分泌蛋白的酶解產(chǎn)物,MP188中的親水性肽段明顯多于MP49,質(zhì)譜鑒定也得到同樣的結(jié)果。 3.與SDS-PAGE相比,2D-HPLC/MS系統(tǒng)有助于發(fā)現(xiàn)一些低豐度的功能性蛋白質(zhì)。 4.在支氣管上皮的惡性演變過程中尋找可能的癌癥早期診斷蛋白質(zhì)標記物,從親水性較強的高分子量或低分子量蛋白質(zhì)入手可能會得到更好的結(jié)果。
[Abstract]:Objective:. Lung cancer, as a serious disease threatening human health, has the highest morbidity and mortality in malignant tumors. The main reason is that traditional imaging and cytological diagnosis can not detect early lung cancer effectively. Most patients are found to have metastasized. Effective early diagnosis technique is of great significance in reducing lung cancer mortality. The present study hopes to develop an effective method for early diagnosis of lung cancer by plasma detection, in order to further explore the mechanism of lung cancer malignancy. Search for possible markers for early diagnosis of cancer to provide basic research information. Methods:. M cell line is an immortalized human bronchial epithelial cell line transformed by SV40-Large T antigen, which provides a good model for studying the genetic changes of cells from normal to cancerous. After concentrated culture in serum-free culture, secretory proteins were collected, concentrated and desalted. The secreted proteins of different algebraic immortalized bronchial epithelial cells were further studied by gel separation, high performance liquid chromatography (HPLC) HPLCX, two-dimensional high performance liquid chromatography (HPLC) 2D-HPLC and mass spectrometry (MS). The change of secretory protein distribution during the development of lung cancer. Results:. 1. The results of SDS-PAGE showed that the molecular weight distribution of secretory protein in MP49 was relatively wide, almost in the range of 10-100kD, but in MP188, The secretory protein was mainly concentrated in the range of high molecular weight and low molecular weight, and the protein content was small in the range of 10-50 KD. 2. The hydrophobic properties of the two samples were similar, but there were some hydrophobic peptides in the secretory proteins of MP49 and more hydrophilic peptides in the secreted proteins of MP188. 3.2D-HPLC / MS analysis showed that there were more peptides in the secretory protein of MP49, the hydrophobic property of the peptide was more uniform than the mass charge ratio of the detected ions, while the number of hydrolyzed products of MP188 secreted protein was relatively small. Some peptides with relatively small mass charge ratio were obtained. 4. The distribution of peptide segments in enzymatic hydrolysis products was evaluated by strong cationic exchange chromatography. 5. The proteins in two samples were identified by mass spectrometric binding database. For MP49, 120 proteins could be identified; for MP1888; 85 proteins could be identified. Conclusion:. 1. The secretory protein distribution of MP49 and MP188 in immortalized bronchial epithelial cells of different algebras was studied by SDS-PAGE and HPLCX 2D-HPLC and MS detection technique. The molecular weight distribution of the protein will gradually transition to the high molecular weight range and the low molecular weight range, while the protein with relatively medium molecular weight will gradually decrease. 2. Compared with MP188 secreting protein, MP49 had more hydrophilic peptides than MP49, and the same result was obtained by mass spectrometry. 3.Compared with SDS-PAGE, the 2D-HPLC / MS system can help to find some low abundance functional proteins. 4. In the process of malignant evolution of bronchial epithelium, a better result may be obtained by looking for possible protein markers for early diagnosis of cancer, starting with high molecular weight or low molecular weight proteins with strong hydrophilicity.
【學位授予單位】：大連醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R329

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