本文選題：人脂肪組織　切入點(diǎn)：內(nèi)皮祖細(xì)胞　出處：《青島大學(xué)》2006年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的 探討人脂肪組織來(lái)源的內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells,EPCs)的分離、培養(yǎng)及鑒定方法,并評(píng)價(jià)EPCs的增殖特性。 方法 脂肪抽吸術(shù)獲取人體脂肪組織,消化法得到的細(xì)胞接種在FN包被(Fibronectin coating)的培養(yǎng)皿內(nèi),用含2%胎牛血清(FBS)的DMEM培養(yǎng),傳至第二代,分誘導(dǎo)組(EGM-2,2%FBS,VEGF,bFGF等)和非誘導(dǎo)組(DMEM,2%FBS)進(jìn)行培養(yǎng)。免疫細(xì)胞熒光分別檢測(cè)誘導(dǎo)組和非誘導(dǎo)組的CD34、vWF和PECAM-1表達(dá);流式細(xì)胞儀(FACS)分別檢測(cè)誘導(dǎo)組和非誘導(dǎo)組的CD34、CD45、CD133和PECAM-1表達(dá)率;熒光顯微鏡觀察細(xì)胞攝取DiI-ac-LDL的功能;誘導(dǎo)組細(xì)胞接種于甲基纖維素半固體培養(yǎng)基進(jìn)行三維培養(yǎng),觀察血管樣結(jié)構(gòu)形成情況。 取原代EPCs分別于培養(yǎng)后第2,4,6,8,10,12,14,16天予以細(xì)胞計(jì)數(shù),將EPCs傳代至P9,分別用細(xì)胞計(jì)數(shù)及MTT法觀察P1、P5、P7、P9細(xì)胞生長(zhǎng)情況。將P2、P5、P7、P9代EPCs用EGM-2誘導(dǎo)培養(yǎng)后,用FACS分別檢測(cè)各代CD34、CD45,CD133,PECAM-1的表達(dá)率。 結(jié)果 誘導(dǎo)組細(xì)胞12天后呈現(xiàn)內(nèi)皮細(xì)胞典型的鋪路石樣形態(tài),未誘導(dǎo)組細(xì)胞未觀察到這種變化;免疫細(xì)胞熒光顯示誘導(dǎo)組vWF、PECAM-1表達(dá)陽(yáng)性,未誘導(dǎo)組細(xì)胞CD34表達(dá)陽(yáng)性;流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示誘導(dǎo)組PECAM-1陽(yáng)性率為67.41±13.35%,非誘導(dǎo)組6.73±2.21%(p0.01);非誘導(dǎo)組CD34陽(yáng)性率為72.39±13.45%,誘導(dǎo)組為16.06±3.86%
[Abstract]:Objective to investigate the isolation, culture and identification of endothelial progenitor cells derived from human adipose tissue, and to evaluate the proliferative characteristics of EPCs. Methods Human adipose tissue was obtained by liposuction. The cells obtained by digestion were inoculated in a petri dish coated with fibronectin. The cells were cultured with DMEM containing 2% fetal bovine serum (FBS) and transferred to the second generation. The expression of CD34VWF and PECAM-1 were detected by immunofluorescence and flow cytometry (FACS). The expression rates of CD34CD45-CD133 and PECAM-1 in induced group and non-induced group were detected by flow cytometry (FCM) and non-induction group (DMEM, 2S), respectively, and the expression rates of CD34VWF and PECAM-1 were detected by flow cytometry. The expression rates of CD34, CD45, CD133 and PECAM-1 were detected by flow cytometry (FCM), and the expression rates of CD34, CD45, CD133 and PECAM-1 were detected by flow cytometry (FCM). The function of uptake of DiI-ac-LDL was observed by fluorescence microscope, and the formation of vascular like structure was observed by inoculation of cells in methylcellulose semisolid medium. The primary EPCs cells were counted on the 2nd day after culture, and then passed to P9. The growth of P1P5P5 P7P9 cells was observed by cell count and MTT method. The expression rate of CD34 CD45-CD133PECAM-1 was detected by FACS after P2P5P5 P7P9 passage EPCs was cultured with EGM-2. Results after 12 days, the cells in the induction group showed typical paving stone morphology of endothelial cells, but no such changes were observed in the cells of the non-induced group, and the expression of vWFnPECAM-1 was positive in the induced group by immunofluorescence, but the expression of CD34 was positive in the uninduced group. Flow cytometry showed that the positive rate of PECAM-1 was 67.41 鹵13.35 in the induced group, 6.73 鹵2.21 in the non-induced group, 72.39 鹵13.45 in the non-induced group and 16.06 鹵3.86% in the induced group.
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R329.2

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