發(fā)布時間：2018-03-06 04:13

  本文選題：微囊化　切入點：雪旺細胞　出處：《南昌大學》2006年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的：探討從成年大白兔周圍神經分離、純化、培養(yǎng)獲取大量雪旺細胞的有效手段，觀察微囊化兔雪旺細胞體外培養(yǎng)過程中的形態(tài)與增殖特征，為神經損傷后修復提供實驗基礎。 方法：利用成年兔發(fā)生Wallerian變性的雙側坐骨神經，經改良后反復差速貼附法進行培養(yǎng)，快速分離純化雪旺細胞，通過相差顯微鏡下觀察雪旺細胞狀態(tài)計數(shù)和S-100細胞免疫組化染色相結合鑒定，，觀察其生長并繪制生長曲線，按照細胞倍增時間公式計算其倍增時間。隨后，海藻酸鈉-氯化鋇一步成囊法包裹生長良好的第三代雪旺細胞，繼續(xù)培養(yǎng)觀察，運用MTT法測定微囊包裹的雪旺細胞和單純雪旺細胞的增殖反應。 結果：發(fā)現(xiàn)利用發(fā)生Wallerian變性后的兔雙側坐骨神經，經改良后差速貼壁培養(yǎng)方法能夠明顯抑制成纖維細胞的生長，獲得大量雪旺細胞，經S-100蛋白免疫組化鑒定，雪旺細胞純度達95％以上，細胞數(shù)量達1×10~6／ml以上；繪制其生長曲線，并計算得出體外培養(yǎng)的第三代雪旺細胞體外倍增時間為3d；MTT實驗檢測：經微囊包裹的雪旺細胞增殖速度明顯弱于未經包裹的單純雪旺細胞對照組，兩者之間差別有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。 結論：本培養(yǎng)方法能夠獲得大量高純度的雪旺細胞，微囊包裹后的雪旺細胞體外生長良好，增殖速度較單純雪旺細胞而言有所減慢。
[Abstract]:Objective: to investigate the effective means of isolating, purifying and culturing a large number of Schwann cells from the peripheral nerves of adult rabbits, and to observe the morphological and proliferative characteristics of microencapsulated Schwann cells in vitro. To provide experimental basis for nerve repair after nerve injury. Methods: the sciatic nerves of adult rabbits with Wallerian denaturation were cultured with modified differential attachment method. Schwann cells were isolated and purified quickly. By observing Schwann cell state count and S-100 cell immunohistochemical staining under phase contrast microscope, the growth of Schwann cell was observed and the growth curve was drawn. The doubling time was calculated according to the formula of cell doubling time. The third generation Schwann cells were encapsulated with sodium alginate and barium chloride. The proliferation of Schwann cells wrapped in microcapsules and Schwann cells were determined by MTT method. Results: it was found that the modified differential adherent culture method could inhibit the growth of fibroblasts and obtain a large number of Schwann cells by using the bilateral sciatic nerve denatured by Wallerian, which was identified by S-100 protein immunohistochemistry. The purity of Schwann cells was over 95%, and the number of Schwann cells was more than 1 脳 10 ~ (10) / ml. The results showed that the multiplication time of the third generation Schwann cells in vitro was 3 d. MTT assay showed that the proliferation rate of Schwann cells encapsulated by microencapsulation was significantly lower than that of unencapsulated Schwann cells (P < 0.05). Conclusion: a large number of Schwann cells with high purity can be obtained by this method. The microencapsulated Schwann cells grow well in vitro and the proliferation rate is slower than that of simple Schwann cells.
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2006
【分類號】：R329

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