本文選題：微囊化　切入點(diǎn)：雪旺細(xì)胞　出處：《南昌大學(xué)》2006年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的：探討從成年大白兔周圍神經(jīng)分離、純化、培養(yǎng)獲取大量雪旺細(xì)胞的有效手段，觀察微囊化兔雪旺細(xì)胞體外培養(yǎng)過(guò)程中的形態(tài)與增殖特征，為神經(jīng)損傷后修復(fù)提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法：利用成年兔發(fā)生Wallerian變性的雙側(cè)坐骨神經(jīng)，經(jīng)改良后反復(fù)差速貼附法進(jìn)行培養(yǎng)，快速分離純化雪旺細(xì)胞，通過(guò)相差顯微鏡下觀察雪旺細(xì)胞狀態(tài)計(jì)數(shù)和S-100細(xì)胞免疫組化染色相結(jié)合鑒定，，觀察其生長(zhǎng)并繪制生長(zhǎng)曲線，按照細(xì)胞倍增時(shí)間公式計(jì)算其倍增時(shí)間。隨后，海藻酸鈉-氯化鋇一步成囊法包裹生長(zhǎng)良好的第三代雪旺細(xì)胞，繼續(xù)培養(yǎng)觀察，運(yùn)用MTT法測(cè)定微囊包裹的雪旺細(xì)胞和單純雪旺細(xì)胞的增殖反應(yīng)。 結(jié)果：發(fā)現(xiàn)利用發(fā)生Wallerian變性后的兔雙側(cè)坐骨神經(jīng)，經(jīng)改良后差速貼壁培養(yǎng)方法能夠明顯抑制成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)，獲得大量雪旺細(xì)胞，經(jīng)S-100蛋白免疫組化鑒定，雪旺細(xì)胞純度達(dá)95％以上，細(xì)胞數(shù)量達(dá)1×10~6／ml以上；繪制其生長(zhǎng)曲線，并計(jì)算得出體外培養(yǎng)的第三代雪旺細(xì)胞體外倍增時(shí)間為3d；MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)：經(jīng)微囊包裹的雪旺細(xì)胞增殖速度明顯弱于未經(jīng)包裹的單純雪旺細(xì)胞對(duì)照組，兩者之間差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 結(jié)論：本培養(yǎng)方法能夠獲得大量高純度的雪旺細(xì)胞，微囊包裹后的雪旺細(xì)胞體外生長(zhǎng)良好，增殖速度較單純雪旺細(xì)胞而言有所減慢。
[Abstract]:Objective: to investigate the effective means of isolating, purifying and culturing a large number of Schwann cells from the peripheral nerves of adult rabbits, and to observe the morphological and proliferative characteristics of microencapsulated Schwann cells in vitro. To provide experimental basis for nerve repair after nerve injury. Methods: the sciatic nerves of adult rabbits with Wallerian denaturation were cultured with modified differential attachment method. Schwann cells were isolated and purified quickly. By observing Schwann cell state count and S-100 cell immunohistochemical staining under phase contrast microscope, the growth of Schwann cell was observed and the growth curve was drawn. The doubling time was calculated according to the formula of cell doubling time. The third generation Schwann cells were encapsulated with sodium alginate and barium chloride. The proliferation of Schwann cells wrapped in microcapsules and Schwann cells were determined by MTT method. Results: it was found that the modified differential adherent culture method could inhibit the growth of fibroblasts and obtain a large number of Schwann cells by using the bilateral sciatic nerve denatured by Wallerian, which was identified by S-100 protein immunohistochemistry. The purity of Schwann cells was over 95%, and the number of Schwann cells was more than 1 脳 10 ~ (10) / ml. The results showed that the multiplication time of the third generation Schwann cells in vitro was 3 d. MTT assay showed that the proliferation rate of Schwann cells encapsulated by microencapsulation was significantly lower than that of unencapsulated Schwann cells (P < 0.05). Conclusion: a large number of Schwann cells with high purity can be obtained by this method. The microencapsulated Schwann cells grow well in vitro and the proliferation rate is slower than that of simple Schwann cells.
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R329

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本文編號(hào)：1573271