本文選題：miRNA　切入點(diǎn)：沙眼衣原體　出處：《天津醫(yī)科大學(xué)》2007年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：[目的]miRNA是近些年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的一類能夠調(diào)控其靶基因表達(dá)水平的小分子RNA家族。目前,1miRNA的功能研究主要集中于生長(zhǎng)發(fā)育、腫瘤發(fā)生、細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡等方面,隨著研究的不斷深入,發(fā)現(xiàn)1miRNA參與了病毒和細(xì)菌這些病原微生物與宿主細(xì)胞的相互作用過(guò)程。本研究的初衷在于進(jìn)一步探索：miRNA在微生物感染宿主細(xì)胞過(guò)程中所發(fā)揮的作用及其調(diào)控機(jī)制,拓展我們關(guān)于miRNA功能的認(rèn)識(shí)。 [方法]首先在本實(shí)驗(yàn)室建立沙眼衣原體的體外培養(yǎng)模型,使用HeLa-229作為宿主細(xì)胞培養(yǎng)擴(kuò)增沙眼衣原體。并通過(guò)方法的改進(jìn)提高了衣原體感染宿主細(xì)胞的效率,使絕大多數(shù)細(xì)胞都被沙眼衣原體感染,為之后的miRNA表達(dá)譜芯片實(shí)驗(yàn)提供更好的基礎(chǔ),而后使用miRNA表達(dá)譜芯片檢測(cè)沙眼衣原體感染宿主細(xì)胞后,細(xì)胞中各個(gè)miRNA的表達(dá)水平的變化。從中篩選表達(dá)水平變化最為顯著的一些,并結(jié)合已有的關(guān)于這些miRNA的研究進(jìn)展進(jìn)行綜合分析,選取一些最有可能與衣原體感染相關(guān)的miRNA作為后續(xù)研究的候選者。最后針對(duì)這些候選的miRNA,根據(jù)其參與的生長(zhǎng)調(diào)控,凋亡等不同機(jī)制,在衣原體感染這個(gè)模型的基礎(chǔ)上,通過(guò)ASO技術(shù)封閉其功能；而后選擇適當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)對(duì)一些細(xì)胞生物學(xué)指標(biāo),如細(xì)胞生長(zhǎng)曲線、Hoechst法凋亡檢測(cè)等指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè),以此來(lái)評(píng)估這止匕miRNA在衣原體感染過(guò)程中所發(fā)揮的作用。 [結(jié)果]1.成功建立了E血清型沙眼衣原體的體外細(xì)胞感染模型,并成功的提高了其感染效率。 2.通過(guò)miRNA表達(dá)譜芯片這種高通量的篩選方法篩選得到了14個(gè)表達(dá)水平明顯變化的miRNA。其中9個(gè)在感染衣原體的細(xì)胞中表達(dá)水平明顯上調(diào),5個(gè)表達(dá)水平明顯下調(diào)。 3.根據(jù)1miRNA表達(dá)譜芯片的結(jié)果提示,發(fā)現(xiàn)通過(guò)人為的封閉表達(dá)水平上升的9個(gè)niRNA的功能,使得沙眼衣原體在感染這種細(xì)胞后最終復(fù)制產(chǎn)生的子代衣原體明顯減少；通過(guò)生長(zhǎng)曲線實(shí)驗(yàn)證明has-miR-190、has-miR-372的低表達(dá)可以明顯的抑制HeLa-229細(xì)胞的分裂增殖。由此推斷沙眼衣原體感染后通過(guò)改變這兩個(gè)miRNA的表達(dá)水平對(duì)宿主細(xì)胞的分裂增殖活性產(chǎn)生影響,最后通過(guò)Hoechst凋亡檢測(cè)證實(shí)了has-miR-15、has-miR-16同時(shí)參與了衣原體感染后所誘導(dǎo)的宿主細(xì)胞凋亡過(guò)程,并發(fā)揮著明顯的作用。 [結(jié)論]沙眼衣原體感染宿主細(xì)胞后對(duì)宿主細(xì)胞中多個(gè)miRNA的表達(dá)水平產(chǎn)生影響,而這些miRNA在衣原體感染和復(fù)制中發(fā)揮著明顯的作用,尤其是has-miR-190、has-miR-372、has-miR-15a、has-miR-16分別通過(guò)調(diào)節(jié)宿主細(xì)胞的增殖和凋亡在感染過(guò)程中發(fā)揮作用。這些發(fā)現(xiàn)為進(jìn)一步研究miRNA對(duì)衣原體感染的影響、闡明衣原體的感染機(jī)理提供了穩(wěn)定的感染模型和大量有意義的線索。也為開(kāi)發(fā)新的抗衣原體感染的治療手段提供了新的理論基礎(chǔ)。
[Abstract]:[objective] miRNA is a new class of small molecular RNA family which can regulate the expression level of its target gene in recent years. At present, the functional studies of miRNA mainly focus on the aspects of growth and development, tumorigenesis, cell proliferation, apoptosis and so on. With the deepening of the research, It was found that 1 miRNA is involved in the interaction of viruses and bacteria with host cells. The purpose of this study is to further explore the role and regulatory mechanism of microbes in the process of infection with host cells. Expand our understanding of miRNA functionality. [methods] the culture model of chlamydia trachomatis in vitro was established in our laboratory. Chlamydia trachomatis was amplified by using HeLa-229 as host cell culture, and the efficiency of chlamydia trachomatis infection was improved by the improvement of the method. Most of the cells were infected with Chlamydia trachomatis, which provided a better basis for the later miRNA expression microarray experiment, and then the miRNA expression microarray was used to detect chlamydia trachomatis infection in host cells. Some of the most significant changes in the level of expression of miRNA were screened from the cells, and combined with the existing research progress on these miRNA to conduct a comprehensive analysis. Some of the most likely miRNA related to chlamydia infection were selected as candidates for further study. Finally, based on the model of chlamydia infection, according to the different mechanisms of growth regulation, apoptosis and other mechanisms involved in these candidate miRNAs, Some cell biological indexes, such as cell growth curve Hoechst method and apoptosis detection, were selected to evaluate the role of miRNA in the process of chlamydia infection. The model of E serotype chlamydia trachomatis infection in vitro was successfully established and its infection efficiency was improved successfully. 2. 2. Fourteen miRNAs with significantly different expression levels were obtained by high throughput screening with miRNA expression microarray, of which 9 were up-regulated and 5 down-regulated in chlamydia infection cells. 3.According to the results of 1miRNA expression microarray, it was found that the function of 9 niRNA, which increased the expression level of chlamydia trachomatis, significantly reduced the generation of chlamydia trachomatis after infection. The results of growth curve experiment showed that the low expression of has-miR-190-has-miR-372 could significantly inhibit the mitotic proliferation of HeLa-229 cells. It was inferred that by changing the expression level of these two miRNA after chlamydia trachomatis infection, the mitotic activity of host cells could be affected by the low expression of has-miR-190-miR-372. Finally, it was confirmed by Hoechst apoptosis detection that has-miR-15 has-miR-16 was involved in the apoptosis of host cells induced by chlamydia infection and played a significant role. [conclusion] Chlamydia trachomatis infection affects the expression of multiple miRNA in the host cells, and these miRNA play a significant role in the infection and replication of chlamydia trachomatis. In particular, has-miR-190C has-miR-372Hhas-miR-15aHS-miR-16 plays a role in the process of infection by regulating the proliferation and apoptosis of host cells, respectively. These findings are intended to further study the effect of miRNA on chlamydia infection. Clarifying the mechanism of chlamydia infection provides a stable infection model and a large number of meaningful clues, and provides a new theoretical basis for the development of new anti-chlamydia infection treatment.
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R3416

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本文編號(hào)：1573243