本文選題：瘧原蟲　切入點(diǎn)：裂殖子頂端膜抗原　出處：《第二軍醫(yī)大學(xué)》2005年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：瘧疾目前仍然是嚴(yán)重威脅人類健康的熱帶傳染病。由于瘧原蟲抗藥性以及蚊媒抗殺蟲劑的抗性產(chǎn)生并廣泛傳播,使傳統(tǒng)的瘧疾防治方法面臨嚴(yán)重困難。研制有效的瘧疾疫苗被認(rèn)為是瘧疾防治的重要途徑。 瘧原蟲(Plasmodium)裂殖子頂端膜抗原1(apical membrane antigen 1,AMA-1)是一個(gè)重要的瘧疾疫苗候選抗原,它存在于所有已經(jīng)驗(yàn)證的瘧原蟲種中,雖然對AMA-1的功能尚不清楚,但目前認(rèn)為該蛋白在瘧原蟲入侵宿主細(xì)胞的過程中發(fā)揮重要作用,對瘧原蟲生長可能起著必不可少的作用。AMA-1的分子結(jié)構(gòu)在種間相當(dāng)保守,其胞外區(qū)含有16個(gè)半胱氨酸,形成以二硫鍵結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的穩(wěn)定的天然構(gòu)象,根據(jù)二硫鍵的位置關(guān)系推測,可分為3個(gè)二硫鍵依賴的區(qū)域(Domain Ⅰ、Domain Ⅱ和DomainⅢ),分別含有3對、2對和3對二硫鍵。 以往研究表明AMA-1具有良好的免疫原性和保護(hù)性,但是對該分子中的保護(hù)性免疫功能域尚缺乏明確的分析和鑒定。本研究以伯氏瘧原蟲(Plasmodium berghei,Pb)AMA-1作為研究對象,利用伯氏瘧原蟲小鼠動物模型進(jìn)行PbAMA-1分子保護(hù)性免疫功能區(qū)域的鑒定,其結(jié)果可以指導(dǎo)含AMA-1區(qū)域或表位的疫苗的構(gòu)建。 首先,我們對我室保存的伯氏瘧原蟲蟲株的AMA-1基因進(jìn)行了測序。在PbAMA-1基因內(nèi)部設(shè)計(jì)兩對引物,用PCR法擴(kuò)增得到兩個(gè)片段,其長度分別為1100bp和900bp,兩個(gè)片段約有200bp的重疊區(qū),對兩個(gè)片段進(jìn)行全序列測序,獲得完整的PbAMA-1胞外區(qū)的基因序列。依據(jù)測序所得的PbAMA-1 DNA序列,推導(dǎo)其氨基酸序列。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道和二硫鍵的位置,將PbAMA-1胞外區(qū)分為三個(gè)彼此之間重疊的基因片段,分別命名為DⅠ、DⅡ和DⅢ。在三個(gè)片段的重疊區(qū)利用同義密碼子替換引入Cla I和Pac I兩個(gè)限制性內(nèi)切酶識別位點(diǎn),用于基因片段間的拼接。采用畢氏酵母密碼子使用頻率重新設(shè)計(jì)DⅠ、DⅡ和DⅢ的核苷酸序列。在該基因中發(fā)現(xiàn)7個(gè)潛在的糖基化位點(diǎn)(Asn-X-Ser/Thr),通過Asn→Gln氨基酸突變消除這些糖基化位點(diǎn)。為便于該蛋白的純化,在基因的3’端添加6個(gè)編碼組氨酸的序列(6×His tag)。序列優(yōu)化后PbAMA-1基因的A+T的含量由原來的69.6%降到了63.0%。
[Abstract]:Malaria continues to be a tropical infectious disease that poses a serious threat to human health. As a result of the resistance of malaria parasites and mosquito vectors to insecticides, The development of effective malaria vaccine is considered to be an important approach to malaria control. Plasmodium) the apical membrane antigen 1 AMA-1) is an important vaccine candidate antigen for malaria, which is present in all confirmed Plasmodium species, although the function of AMA-1 is unclear. However, it is believed that this protein plays an important role in the invasion of host cells by Plasmodium, and may play an essential role in the growth of Plasmodium. AMA-1 is quite conserved in species, and its extracellular domain contains 16 cysteine. A stable natural conformation based on the disulfide bond structure is formed. According to the position relationship of the disulfide bond, it can be divided into three disulfide bond dependent domains: domain 鈪，

本文編號：1573608