本文選題：漢坦病毒　切入點(diǎn)：熒光定量PCR　出處：《中國病原生物學(xué)雜志》2014年04期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的通過建立漢坦病毒實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法,快速準(zhǔn)確地檢測(cè)漢坦病毒。方法根據(jù)漢灘型和漢城型漢坦病S片段基因的序列分別設(shè)計(jì)特異性探針引物,使用含有目的基因片段的重組質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,建立檢測(cè)兩型漢坦病毒的實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法。結(jié)果建立的檢測(cè)方法特異性良好,與其他常見病原不發(fā)生交叉反應(yīng);最低檢測(cè)限為101copies/μl,靈敏度高;不同梯度定量模板的拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)值與Ct值之間線性關(guān)系表達(dá)式分別為y=-3.4607x+40.988(HTN),y=-3.5307x+39.356(SEO),擴(kuò)增效率分別為92.2%(HTN)和92.6%(SEO),相關(guān)系數(shù)R2分別為0.9968(HTN)和0.9997(SEO),呈良好的線性關(guān)系,且重復(fù)性好。結(jié)論建立的實(shí)時(shí)熒光定量PCR靈敏度高,重復(fù)性好,可用于漢坦病毒的快速檢測(cè),并可初步辨別漢灘型和漢城型漢坦病毒,對(duì)腎綜合征出血熱的病原早期診斷和流行病學(xué)調(diào)查有較好的應(yīng)用價(jià)值。
[Abstract]:Objective to establish a real-time fluorescent quantitative PCR assay for the detection of Hantavirus. Methods specific probe primers were designed according to the sequence of Hantaan type and Seoul type Hantavirus S fragment gene. The standard curve of recombinant plasmid containing target gene fragment was used to establish a real-time fluorescent quantitative PCR method for the detection of Hantavirus. The results showed that the method was specific and did not cross with other common pathogens. The lowest detection limit was 101copies/ 渭 l, the sensitivity was high, the linear relationship between logarithmic values and Ct values of different gradient quantitative templates was YYPE-3.4607x 40.988 HTNNCE-3.5307x 39.356SSEOO, the amplification efficiency was 92.2HTN) and 92.6SECON, the correlation coefficient (R2) was 0.9968m HTN) and the correlation coefficient (R _ 2) was 0.9968m (HTNs) and 0.9997m (SEOO), respectively, showing a good linear relationship, and the detection efficiency was 92.2 HTNs and 92.6SECON, respectively, and the correlation coefficient (R ~ 2 was 0.9968) and 0.9997%, respectively. Conclusion the established real-time fluorescent quantitative PCR has high sensitivity and reproducibility, and can be used for rapid detection of Hantavirus and preliminary identification of Hantaan and Seoul Hantavirus. It is valuable for the early diagnosis and epidemiological investigation of hemorrhagic fever with renal syndrome.
【作者單位】： 南京軍區(qū)軍事醫(yī)學(xué)研究所;浙江省疾病預(yù)防控制中心;
【基金】：國家重大傳染病防治專項(xiàng)(No.2013ZX10004103,2013ZX10004-104,2013ZX10004-203,2013ZX10004-218,2012ZX10004801-004) 國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.81171609) 全軍后勤科研“十二五”重大項(xiàng)目(No.AWS11C001,AWS11C009) 南京軍區(qū)醫(yī)學(xué)科技課題(No.12MA119,10Z039,11Z040) 江蘇省科技支撐計(jì)劃(社會(huì)發(fā)展)項(xiàng)目(No.BE2013603,BE2012609)
【分類號(hào)】：R373.9

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1566618