B淋巴細(xì)胞刺激因子(B cell activating factor belonging to the TNF family，BAFF)是1999年新發(fā)現(xiàn)的一個(gè)細(xì)胞因子，屬于腫瘤壞死因子超家族成員。人BAFF(hBAFF)屬Ⅱ型跨膜糖蛋白，全長(zhǎng)285個(gè)氨基酸，主要表達(dá)于單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、中性粒細(xì)胞表面。BAFF有三種受體：TACI、BCMA和BAFF-R。Moore等人研究發(fā)現(xiàn)，BAFF受體僅表達(dá)于B細(xì)胞和B細(xì)胞起源的細(xì)胞系上。 實(shí)驗(yàn)表明，BAFF與B淋巴細(xì)胞的活化、增殖、抗體產(chǎn)生、免疫球蛋白類別轉(zhuǎn)換等有關(guān)。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，BAFF信號(hào)異常可能與多種自身免疫性疾病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、干燥綜合征等相關(guān)，也與腫瘤如多發(fā)性骨髓瘤、慢性B淋巴細(xì)胞性白血病等相關(guān)。對(duì)hBAFF的深入研究將會(huì)成為研究人類自身免疫性疾病以及B細(xì)胞系腫瘤發(fā)病機(jī)理的新熱點(diǎn)，而阻斷BAFF發(fā)揮生物學(xué)作用的單克隆抗體具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。 本研究利用RT-PCR的方法從人外周血單個(gè)核細(xì)胞擴(kuò)增得到BAFF胞外區(qū)83—285氨基酸(hsBAFF_(83-285))的編碼基因，與原核表達(dá)載體pET-30a(+)進(jìn)行連接，在BL21(DE3)中重組蛋白得到了大量表達(dá)，主要以包涵體形式存在于沉淀中。我們將純化的重組蛋白免疫BALB／c小鼠，采用雜交瘤技術(shù)，用甲基纖維素半固體培養(yǎng)基培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞，制備了單克隆抗體。通過免疫雙向擴(kuò)散、間接ELISA、Western blot和流式細(xì)胞技術(shù)鑒定了抗體的特性。同時(shí)，我們從人外周血單個(gè)核細(xì)胞cDNA中擴(kuò)增得到可溶形式BAFF(hsBAFF)的編碼基因，將其克隆入原核表達(dá)載體pGEX-4T-1中。優(yōu)化各種誘導(dǎo)表達(dá)條件后，得到了重組蛋白的可溶形式表達(dá)。通過擴(kuò)大培養(yǎng)，利用GST親和柱純化裂解上清中可溶形式蛋白，并將純化后蛋白免疫新西蘭兔制備了抗hsBAFF的兔多抗血清。ELISA、Western blot鑒定了該多抗血清能與GST-hsBAFF重組蛋白發(fā)生特異性反應(yīng)。 本研究所制備的抗hBAFF單克隆抗體和多克隆抗體可以為BAFF的基礎(chǔ)與臨床研究提供有力的工具，為深入研究BAFF與人類自身免疫性疾病和B細(xì)胞系腫瘤的關(guān)系，探討針對(duì)BAFF的自身免疫性疾病的檢測(cè)新方法和治療新途徑奠定了基礎(chǔ)。


本文編號(hào)：1567125