本文關(guān)鍵詞： 樹突狀細(xì)胞 T細(xì)胞克隆 NOD.H-2~(h4)鼠　出處：《山西醫(yī)科大學(xué)》2006年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 目的 實驗性免疫性甲狀腺炎是自身免疫性疾病研究的一個典型實例。為了開創(chuàng)一個研究的新途經(jīng),闡明T、B細(xì)胞在實驗性免疫性甲狀腺炎中的免疫作用及DC遞呈Tg產(chǎn)生的T細(xì)胞克隆的免疫作用,闡明實驗性免疫性甲狀腺炎的誘發(fā)機制,我們以甲狀腺球蛋白(Thyroglobulin,Tg)為抗原,樹突狀細(xì)胞為抗原遞呈細(xì)胞建立了抗原特異性的T細(xì)胞克隆,并進行了被動轉(zhuǎn)移實驗。 材料及方法 NOD.H-2h4鼠飼養(yǎng)于SPF無菌環(huán)境中,喂養(yǎng)0.05%碘化鈉8周后,每兩周采血,用ELISA測Tg水平,然后每只小鼠用100ug Tg的劑量混勻于福氏完全佐劑中免疫小鼠兩次,用淋巴細(xì)胞增殖實驗優(yōu)化Tg的含量,尋找樹突狀細(xì)胞攝取遞呈Tg的最適抗原量,然后,將免疫后NOD.H-2h4小鼠的脾細(xì)胞作為T細(xì)胞與同基因鼠的并與抗原孵育過的樹突狀細(xì)胞共培養(yǎng)。同時選用這六個T細(xì)胞克隆中的四個T細(xì)胞克隆---F11,2D11,H8,G8,將NOD.H-2h4鼠分為X射線照射組和正常NOD.H-2h4鼠組,進行了T細(xì)胞克隆的被動轉(zhuǎn)移實驗。結(jié)果 建立了六個Tg特異性的T細(xì)胞克隆,這些細(xì)胞克隆在體外培養(yǎng)時間大于兩年以上,流式細(xì)胞儀檢測其表型均為CD4+,而且分泌IFN-γ,不分泌IL-4。T細(xì)胞克隆被動轉(zhuǎn)移實驗表明:所有的四個T細(xì)胞克隆均不能引起正常NOD.H-2h4鼠的甲狀腺炎。四個克隆中三個T細(xì)胞克隆可引起X線照射組NOD.H-2h4鼠的甲狀腺炎,而小鼠的照射劑量(475拉德)足夠去除受鼠的抑制性細(xì)胞的功能。2D11克隆被動轉(zhuǎn)移的結(jié)果亦表明:T細(xì)胞克隆在體內(nèi)有輔助B細(xì)胞產(chǎn)生抗體的能力。 結(jié)論 抗原特異性的T細(xì)胞克隆的建立產(chǎn)生及維持,開創(chuàng)了一個研究自身免疫性疾病的新途經(jīng)。樹突狀細(xì)胞起抗原遞呈細(xì)胞的作用,在T細(xì)胞系及T細(xì)胞克隆的建立中是極為重要的,否則,T細(xì)胞即使在Tg及IL-2存在的培養(yǎng)環(huán)境中也僅能存活數(shù)天。T細(xì)胞克隆被動轉(zhuǎn)移的實驗,除了可以了解病理產(chǎn)生過程,轉(zhuǎn)移的T、B細(xì)胞存活的時間長短外,也有助于了解T、B細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用及自身免疫性甲狀腺炎的誘發(fā)機制,為研究實驗性免疫性甲狀腺炎的病理產(chǎn)生過程提供了理論依據(jù)和實驗手段。
[Abstract]:Purpose. Experimental immune thyroiditis is a typical example of autoimmune disease. To elucidate the immune function of ThyroglobulinTg in experimental thyroiditis and the immune effect of T cell clone produced by DC, and to elucidate the inducing mechanism of ThyroglobulinTg, we take ThyroglobulinTg as antigen. Antigen-specific T cell clones were established from dendritic cells as antigen presenting cells and passive transfer experiments were carried out. Materials and methods. NOD.H-2h4 mice were fed in SPF aseptic environment. After feeding 0.05% sodium iodide for 8 weeks, blood samples were collected every two weeks, TG levels were measured with ELISA, and then each mouse was mixed with 100ug TG for twice in Freund's complete adjuvant. Lymphocyte proliferation test was used to optimize the content of TG, to find the optimal antigen quantity for dendritic cells to absorb and present TG, and then, The spleen cells of immunized NOD.H-2h4 mice were co-cultured with dendritic cells of allogeneic mice and incubated with antigens. At the same time, four of the six T cell clones, F112D11D11H8G8, were used to divide NOD.H-2h4 mice into X-rays. Shooting group and normal NOD.H-2h4 group, The passive transfer test of T cell clone was carried out. Results. Six TG-specific T cell clones were established, which were cultured for more than two years in vitro. The phenotypes of these clones were detected as CD4 by flow cytometry. Moreover, the passive transfer assay of secreting IFN- 緯 and non-secreting IL-4.T cell clone showed that none of the four T cell clones could induce thyroiditis in normal NOD.H-2h4 mice, and three of the four clones could induce thyroiditis in NOD.H-2h4 mice exposed to X-rays. The results of passive transfer of mouse inhibitory cells. 2D11 clones showed that the clone of T cells had the ability to assist B cells to produce antibodies in vivo. Conclusion. The establishment and maintenance of antigen-specific T cell clones has opened up a new way to study autoimmune diseases. Dendritic cells act as antigen-presenting cells. It is very important in the establishment of T cell line and T cell clone, otherwise T cell can survive for only a few days in the culture environment of TG and IL-2. In addition to the survival time of metastatic TG-B cells, it is helpful to understand the immunomodulatory effect of TG-B cells and the inducing mechanism of autoimmune thyroiditis. It provides theoretical basis and experimental means for studying the pathological process of experimental immune thyroiditis.
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：R392;R581.4

【共引文獻】

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本文編號：1548324