本文關(guān)鍵詞：抗IL-33全人源scFv-Fc抗體的可溶性表達(dá)與鑒定

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【摘要】：通過對通用型在細(xì)菌中可溶性表達(dá)scFv-Fc抗體載體的構(gòu)建,對抗IL-33全人源scFv-Fc抗體進(jìn)行可溶性表達(dá)并鑒定。擴(kuò)增人IgG1Fc片段及前期篩選的抗IL-33單鏈抗體(scFv)DNA,分別插入到改建的載體pLZ16中,構(gòu)建可溶性重組表達(dá)pLZ16-scFv-Fc質(zhì)粒。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入E.coli DH5αF’,菌落經(jīng)PCR和測序驗證表明我們成功構(gòu)建了pLZ16-scFv-Fc重組質(zhì)粒。將陽性克隆子分別于32℃IPTG表達(dá)5h或25℃無IPTG表達(dá)50h,用HRP標(biāo)記抗人IgG1Fc抗體進(jìn)行檢測,結(jié)果顯示25℃無IPTG表達(dá)50h時,表達(dá)蛋白分泌在細(xì)菌周質(zhì)間,可明顯檢測到scFv-Fc的可溶性表達(dá);western blotting結(jié)果顯示,25℃無IPTG表達(dá)的scFv-Fc為65kD左右,其可溶性表達(dá)量較32℃表達(dá)量高。本研究成功構(gòu)建了pLZ16-scFv-Fc重組質(zhì)粒,并在E.coli DH5αF’中成功可溶性表達(dá)抗IL-33全人源scFv-Fc抗體。
【作者單位】： 西南醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： scFv-Fc IL- 可溶性表達(dá)
【基金】：四川省科技廳項目(2015JY0218;013SZZ005) 四川省教育廳項目(15ZA0157;16TD0022)
【分類號】：R392
【正文快照】： 2005年,自Schmitz等發(fā)現(xiàn)IL-33以后,引起了人們對IL-33研究的熱潮。IL-33是IL-1家族新成員,是ST2受體的特異性配體,主要參與調(diào)節(jié)Th2型免疫應(yīng)答與炎癥反應(yīng),在過敏性疾病和自身免疫性疾病中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。IL-33可刺激Th2細(xì)胞的分化,誘導(dǎo)Th2細(xì)胞向淋巴結(jié)和組織中募集[1];I

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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5 劉春雨;崔恒;昌曉紅;葉雪;付天云;程洪艷;張果;熊英;成夜霞;張麗;趙e，

本文編號：950373